提高免疫檢測光纖生物探針表面性能的方法

文檔序號:5975775
專利名稱:提高免疫檢測光纖生物探針表面性能的方法
技術領域
本發明涉及一種能夠提高用于免疫檢測的光纖生物探針表面性能的方法。
背景技術
隨著科學技術的發展,光纖生物探針已經被廣泛的應用于許多生物醫學 領域。常用的光纖生物探針都是將捕獲生物分子固定到光纖纖芯的表面。蛋 白質是一種組成、結構復雜的有機大分子,幾乎能與所有固體表面發生相互 作用并吸附在表面上。在光纖生物探針的制作中,不但需要把蛋白質分子穩 定的固定在表面上,保持其生物活性,而且還需要能夠有效的在表面上抑制 非特異性吸附。
目前,在光纖生物探針表面上固定蛋白質主要是通過物理吸附或共價連 接的方法。物理吸附的方式是通過兩者之間的靜電、疏水和氫鍵等相互作用 將蛋白質固定到光纖纖芯表面上。另一種較為常用的在光纖生物探針表面上 固定蛋白質的方法是通過共價連接的方式。
但是這兩種方法制作的光纖生物探針都不是很理想。通過物理吸附在光 纖生物探針表面固定蛋白質分子,蛋白質分子的空間構象會發生變化,使得
其生物活性降低;而且通過這種方法固定的蛋白質很不穩定,容易發生脫落 以及由于其它蛋白質分子的競爭吸附而造成的流失。通過共價連接在光纖生 物探針表面固定蛋白質分子,使得蛋白質分子相對比較穩定;但是,在蛋白 質分子與光纖生物探針表面間的靜電相互作用大,從而使得蛋白質的空間構 象發生更大的改變,引起生物活性的進一步降低。另外檢測時還需要抑制蛋
白質分子在固體表面上的非特異性吸附。

發明內容
本發明的目的在于克服已有的在光纖生物探針表面固定蛋白質的方法使 得蛋白質空間構象發生較大的改變、蛋白質生物活性低、固定的蛋白質不穩 定的缺陷,為了把蛋白質分子穩定的固定在表面上,保持其生物活性,而且 可以抑制蛋白質分子在光纖生物探針表面上的非特異性吸附,提供一種提高 免疫檢測光纖生物探針表面性能的方法。
本發明的目的是通過如下的技術方案實現的
在光纖生物探針的纖芯表面上先固定一層小分子量的蛋白質分子,再固 定作為捕獲分子層的蛋白質分子。
所述的小分子量的蛋白質分子的分子量為1 X 103 9X 105道爾頓。
本發明方法,可以改善光纖生物探針表面的特性,其優點在于 一方面, 小分子量的蛋白質分子覆蓋在光纖生物探針的表面,由于蛋白質分子之間相 互排斥的作用,從而抑制了待固定的蛋白質分子與光纖生物探針表面的直接 接觸,降低了待固定的蛋白質分子與光纖生物探針表面間的靜電相互作用, 保證了蛋白質分子的生物活性,同時也抑制了蛋白質分子在光纖生物探針表 面上的非特異性吸附;另一方面,小分子量的蛋白質分子的帶有氨基、羧基、 羥基、巰基等活性基團的極性氨基酸殘基多位于蛋白質分子表面,這些基團 活化后可以直接用于固定待固定的蛋白質分子,形成穩定的共價鍵。
具體實施例方式
實施例1
把分子量為68000道爾頓的牛血清白蛋白分子以共價鍵固定到經醛基改 性的光纖生物探針的表面上,達到飽和,得到固定了小分子量蛋白質分子的 光纖生物探針;
把上述己經固定牛血清白蛋白分子的光纖生物探針浸泡到戊二醛溶液中
活化30分鐘,牛血清白蛋白分子的部分氨基同戊二醛反應,使牛血清白蛋白 分子表面帶有醛基;
配制lmg/mL待固定的蛋白質分子一人免疫球蛋白的溶液,其中含有 0.5wt% Tween 20;將上述已經活化的固定了牛血清白蛋白分子的光纖生物探 針放入上述的人免疫球蛋白溶液中浸泡30分鐘,以將人免疫球蛋白固定到光 纖生物探針的表面。
實施例2
把分子量為40000道爾頓的辣根過氧化物酶以共價鍵固定到經醛基改性 的光纖生物探針的表面上,達到飽和,得到固定了小分子量蛋白質分子的光 纖生物探針;
把上述已經固定牛血清白蛋白分子的光纖生物探針浸泡到戊二醛溶液中 活化30分鐘,牛血清白蛋白分子的部分氨基同戊二醛反應,使牛血清白蛋白 分子表面帶有醛基;
配制lmg/mL待固定的蛋白質分子一人免疫球蛋白的溶液,其中含有0。 05wt% Tween 20;將上述已經活化的固定了牛血清白蛋白分子的光纖生物探 針放入上述的人免疫球蛋白溶液中浸泡30分鐘,以將人免疫球蛋白固定到光 纖生物探針的表面。
權利要求
1. 一種提高免疫檢測光纖生物探針表面性能的方法,其特征在于在光纖生物探針的纖芯表面上先固定一層小分子量的蛋白質分子,再固定作為捕獲分子層的蛋白質分子。
2. 根據權利要求1所述的提高免疫檢測光纖生物探針表面性能的方法,其特征在于所述的小分子量的蛋白質分子的分子量為1X10S 9X1()S道爾頓。
全文摘要
本發明涉及一種提高免疫檢測光纖生物探針表面性能的方法,其特點是在光纖生物探針的纖芯表面上先固定一層小分子量的蛋白質分子,再固定作為捕獲分子層的蛋白質分子。本發明方法,可以改善光纖生物探針表面的特性,小分子量的蛋白質分子覆蓋在光纖生物探針的表面,由于蛋白質分子之間相互排斥的作用,從而抑制了待固定的蛋白質分子與光纖生物探針表面的直接接觸,降低了待固定的蛋白質分子與光纖生物探針表面間的靜電相互作用,保證了蛋白質分子的生物活性,同時也抑制了蛋白質分子在光纖生物探針表面上的非特異性吸附。
文檔編號G01N33/53GK101387638SQ20081005130
公開日2009年3月18日 申請日期2008年10月22日 優先權日2008年10月22日
發明者劉曉敏, 孔祥貴, 孫雅娟, 張友林, 曾慶輝 申請人:中國科學院長春光學精密機械與物理研究所
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