基于苯并呋喃結構的新型CDK9抑制劑、其制備方法及應用與流程

文檔序號:18232196發布日期:2019-07-20 01:32
基于苯并呋喃結構的新型CDK9抑制劑、其制備方法及應用與流程

本發明涉及到生物醫藥領域,具體包括苯并呋喃結構的新型CDK9抑制劑一系列衍生物和其用途,具有涉及到作為CDK9抑制劑的化合物、上述化合物在藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或前藥,及上述化合物的藥物組合物的用途。

技術背景

細胞周期蛋白依賴性激酶(Cyclin-dependent kinases,CDKs)是絲氨酸/蘇氨酸激酶家族的一員,與調節亞基細胞周期蛋白形成異二聚體來發揮其催化功能。CDKs家族成員根據其功能的差異可以分為周期性CDKs和轉錄性CDKs,前者主要包括CDK1/2/4/6,控制細胞的周期進程;后者主要包括CDK7/8/9,調節mRNA的轉錄和加工(Malumbres M.et al.Genome Biol.,2014,15:122)。轉錄性CDKs的過表達或者功能增強會造成其下游特定基因的表達明顯增加,特別是抗凋亡蛋白Mcl-1,從而引起腫瘤的發生(Morales F.et al.Cell Cycle,2016,15:519-27)。近年來發現非選擇性的CDK抑制劑可以通過抑制CDK9的功能來達到抗腫瘤效應,因此對CDK抑制劑的研究也得到了人們的關注(Krystof V.et al.Target,Curr.Pharm.Des.,2012,18:2883–2890)。研究發現CDK9的過表達與多種腫瘤的發生、炎癥的發生及病毒的復制有關,例如急性髓性白血病、乳腺癌、結腸癌和前列腺癌等及人類免疫缺陷病毒和腺病毒等(Franco L.C.et al.J.Cell Biochem.,2017,119:1273-1284)。這些發現表明了CDK9是治療癌癥的有效靶標?,F在已經進入臨床的CDK9抑制劑包括Flavopiridol、Dinaciclib、SNS-032和CYC065等,但都缺乏對CDK9的選擇性。還有目前處于臨床前研究的CDK9選擇性抑制劑如LY2857785、LDC000067、BAY-1143572等。

目前研究較多的含苯并呋喃骨架的化合物主要有漢黃芩素和Flavopiridol。漢黃芩素是從漢黃芩中分離出來的,體內外藥理學實驗都表明漢黃芩素具有抗炎、抗氧化及抗腫瘤活性且毒性較低,在對其抗腫瘤活性的機制進行研究時發現其主要靶標是CDK9,并于2014年獲得CFDA的臨床批件,但漢黃芩素的抗腫瘤活性較弱(CDK9:IC50=198μM)并且其成藥性較差。Flavopiridol是非選擇性的CDK抑制劑,對CDK9有較強的抑制活性(IC50=20nM)。Flavopiridol對慢性淋巴細胞白血病、乳腺癌、肝癌及前列腺癌等多種癌癥都具有一定的治療作用,現在被FDA批準為治療慢性淋巴細胞白血病的孤兒藥,但Flavopiridol容易引起腹瀉等副作用。為了進一步提高苯并呋喃類化合物對CDK9的選擇性,改善其成藥性,我們設計并合成了一系列含苯并呋喃類結構的CDK9小分子抑制劑。



技術實現要素:

本發明的主要目的是尋找一類含苯并呋喃結構的,高效低毒且具有優良藥物代謝性質的CDK9小分子抑制劑,用于疾病的預防和/或治療。

本發明提供了通式(I)所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或前藥。

其中,所述R1為氫、

所述R2為氫、甲基、乙基;

所述R3為甲基、乙基、異丙基、

所述Y為N,Y的位置為所在苯環的3’位或者4’位;

所述m為1、2或者3;

所述X為O、CRa或者NRb;

所述Ra為氫、羥基或者

所述Rb為氫、甲基、乙基、異丙基、

本發明所述的通式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或前藥,其特征在于,藥學上可接受的鹽是指通式I的化合物和藥學上可接受的酸形成的鹽包括無機酸鹽,所述的無機酸包括:碳酸、碳酸氫根、硫酸、硫酸氫根、磷酸、磷酸一氫根、磷酸二氫根、硝酸、氯化氫、溴化氫、氫碘酸等;以及有機酸鹽,所述的有機酸包括乙酸、草酸、乳酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、丙酮酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、阿魏酸、馬來酸、異丁酸、丙二酸、辛二酸、扁桃酸、反丁烯二酸等類似的酸;還包括與氨基酸形成的鹽等。

本發明中所優選的部分化合物結構如下:

本發明所述的通式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或前藥用于開發以CDK9為靶點的小分子抑制劑。

一種藥物組合物,其特征在于,本發明所述的通式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或前藥,和藥學上可接受的載體。

所述的一種藥物組合物,其特征在于,本發明所述的通式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或前藥和藥學上可接受的輔料。

本發明所述的通式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或前藥,或一種藥物組合物,在制備預防和治療抗病毒藥物和抗腫瘤藥物中的用途。

本發明所述的通式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或前藥在制備預防和治療抗病毒藥物和抗腫瘤藥物中的用途,其特征在于,所述的病毒包括人類免疫缺陷病毒、巨細胞病毒、EB病毒、腺病毒、皰疹、人T細胞淋巴細胞病毒、甲型流感病毒和登革熱病毒。

本發明所述的通式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或前藥在制備預防和治療抗病毒藥物和抗腫瘤藥物中的用途,其特征在于,所述的腫瘤包括神經系統癌癥、血液癌癥、肝癌、肌肉癌、乳腺癌、生殖系統癌癥、肺癌、胃腸癌、皮膚癌、泌尿系統癌癥和食管癌。

有益效果

本發明針對漢黃芩素抗腫瘤活性低,成藥性差的缺點,本發明對其母核進行改造合成了一系列的化合物,特別是針對3’或4’位引入含N環狀取代基,含氮環狀取代基的引入既提高了化合物對CDK9的選擇性,同時改善了化合物的理化性質。該類化合物是全新化合物,未見文獻報道,同時發明人針對合成的化合物做了一系列活性,具體來說本發明大部分化合物對癌細胞均有較好的抑制活性,相對于漢黃芩素有很大的提高,活性較為突出的化合物主要有L26、L27、L32和L38。

本發明部分化合物相對漢黃芩素對CDK9具有較好的抑制活性,與Flavopiridol相當,但對CDK9的選擇性得到了明顯的提高。特別是化合物L26對CDK9的抑制活性與Flavopiridol基本相當,其IC50值達到了3.0nM,化合物L32對CDK9/CDK2的選擇性是漢黃芩53倍,是Flavopiridol的45倍。

相對于CDK家族其他CDK來說,本發明部分化合物對CDK9具有較好的抑制活性且對CDK9的選擇性也優于Flavopiridol。

本發明優選化合物L27的溶解度較好,特別是在酸性條件下(pH=4.5)的溶解度相對于其他化合物得到了大幅度的提高在相同條件下其溶解度是漢黃芩素的500倍,Log D值也是處于合理的范圍內。

選擇活性較好化合物L26能通過抑制CDK9的活性,使得2位Ser磷酸化的RNA聚合酶II的表達量明顯減少,并能使其下游的短促凋亡蛋白Mcl-1的表達量呈濃度依賴性的減少,使Cleaver caspase 3的表達量呈濃度依賴性的增加。這表明了化合物L26是通過抑制CDK9的活性,使得下游的促凋亡蛋白的表達增加,進而引起細胞發生凋亡的。

附圖說明

圖1本發明中化合物L38誘導MV4-11細胞凋亡實驗結果;

圖2本發明中化合物L38對CDK9及其下游蛋白及凋亡蛋白表達量的影響。

具體實施方式

下面通過具體的實施例對本發明做進一步的詳細說明,但并不將本發明限制在所舉的實施例范圍之中。

實施例1

第一步:中間體I-2的制備

將間苯三酚I-1(63g,0.5mol)加入到300mL無水乙醚中,室溫攪拌溶解,再依次加入無水ZnCl2(13.4g,0.1mol)和無水乙腈(50g,1.25mol),0℃下通入干燥的HCl氣體反應40h,TLC檢測(V石油醚:V乙酸乙酯=1:2)反應完全,靜止待反應液溫度升至室溫,抽濾,濾餅烘干至恒重后溶于200mL水中,加熱回流6h,析出大量固體,冷卻至室溫,抽濾,烘干,得白色固體60g,收率71%。m.p.119~121℃。

第二步:中間體I-3的制備

將中間體I-2(33.6g,0.2mol)加入到350mL無水丙酮,室溫攪拌溶解,再加入63.48g K2CO3(0.46mol),室溫條件下滴加硫酸二甲酯(39.78mL,0.42mol),1h左右滴加完畢,45℃繼續反應4h,TLC檢測(V石油醚:V乙酸乙酯=3:1)反應完全,靜止冷卻至室溫,抽濾,濾液倒入5倍體積的水中,用1M HCl調pH=3-4,析出大量固體。抽濾,干燥得白色固體32.5g,收率83%。m.p.80~82℃。

第三步:中間體I-4的制備

將中間體I-3(30g,15mmol)加入到450mL乙醇,室溫攪拌溶解,再加入11.39g間溴苯甲醛(92mmol),冰浴條件下滴加7%KOH水溶液280mL(0.21mol),滴加過程中保持溫度小于5℃。1h左右滴加完畢,40℃繼續反應10h,TLC檢測(V石油醚:V乙酸乙酯=6:1)反應完全,靜止冷卻至室溫,反應液倒入10倍體積的水中,用6M HCl調pH=3-4,析出大量固體。抽濾,烘干,得黃色固體50.1g,收率90%。m.p.190~193℃。

第四步:中間體I-5的制備

中間體I-4(16.7g,46mmol)加入到43mL無水DMSO,升溫至60℃,攪拌溶解,再加入催化量的I2(0.36g,1.4mmol),升溫至130℃繼續反應5h,TLC檢測(V石油醚:V乙酸乙酯=3:1)反應完全,反應液趁熱倒入10倍體積的飽和硫代硫酸鈉水溶液中,析出大量固體。抽濾,烘干,得淡黃色固體16.3g,收率97%。m.p.278~280℃。

第五步:中間體I-6的制備

將中間體I-5(20g,55mmol)加入到48%的氫溴酸300mL中,回流反應60h,TLC檢測(V石油醚:V乙酸乙酯=2:1)反應完全,靜止冷卻至室溫,反應液倒入10倍體積的冰水中,析出大量固體。抽濾,濾餅用水多次洗滌至pH呈中性,干燥得粗品20.9g,聚酰胺柱層析(V石油醚:V乙酸乙酯=2:1)得淡黃色固體15g,收率83%。m.p.192~196℃。

第六步:中間體I-7的制備

將中間體I-6(21g,64mmol)和氫氧化四甲銨(69g,38mmol)加入到450mL水中,室溫攪拌溶解,再每隔20min分8次加入過硫酸鉀(43g,169mmol),加入過程中保持溫度低于30℃,室溫繼續反應3h,TLC檢測(V石油醚:V乙酸乙酯=2:1)反應完全,抽濾,濾液用磷酸二氫鉀(約30g)調pH=6-7,析出固體,再每隔5min分3次加入45g氯化鈉,室溫攪拌過夜。抽濾,濾餅用20mL甲醇洗滌,烘干,得土黃色固體19g,收率60%。

第七步:中間體I-8的制備

將中間體I-7(7.8g,17.7mmol)加入到55mL DMF,室溫攪拌溶解,再加入4.9g K2CO3(35.5mmol),室溫條件下滴加溴化芐(2.8mL,23mmol),5min左右滴加完畢,60℃繼續反應5h,TLC檢測(V二氯甲烷:V甲醇=10:1)反應完全,靜止冷卻至室溫,抽濾,濾餅用20mL甲醇洗滌,濾液用6M HCl調pH=1-2,室溫攪拌過夜,析出固體。抽濾,濾餅用10mL甲醇洗滌,烘干,得橙黃色固體2.6g,收率38.8%。m.p.290~292℃。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.69(s,1H,5-OH),9.13(s,1H,8-OH),7.92(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.45(m,5H,Ar-H),7.12(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.93(s,1H,CHCO),6.79(s,1H,Ar-H),5.34(s,2H,OCH2-Ar)ppm.

第八步:中間體I-9的制備

將中間體I-8(720mg,1.9mmol)加入到60mL乙腈,室溫攪拌溶解,再加入660mgK2CO3(4.8mmol)和240mg硫酸二甲酯(2.1mmol),回流反應4.5h,TLC檢測(V石油醚:V乙酸乙酯=2:1)反應完全,靜止冷卻至室溫,抽濾,濾餅用20mL二氯甲烷洗滌,濾液減壓蒸除溶劑,粗品用正己烷和二氯甲烷混合溶劑重結晶,得黃色固體685mg,收率92%。m.p.210~212℃。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.70(s,1H,5-OH),7.93(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.46(m,5H,Ar-H),7.10(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.94(s,1H,CHCO),6.80(s,1H,Ar-H),5.33(s,2H,OCH2-Ar),3.85(s,3H,ArOCH3)ppm.

第九步:中間體I-10的制備

將中間體I-9(185mg,0.47mmol)加入到10mL無水DMSO,升溫至60℃,攪拌溶解,再在N2保護下依次加入410.7mg嗎啉(4.8mmol)和121.9mg DIEA(0.94mmol),90℃反應10h,TLC檢測(V石油醚:V乙酸乙酯=4:1)反應完全,反應液趁熱倒入10mL飽和食鹽水中,靜止3h,抽濾,濾餅用10mL水洗滌,最終得到黃色固體178mg,產率74.9%。m.p.220~225℃.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.79(s,1H,5-OH),7.86(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.44(m,5H,Ar-H),6.97(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.55(s,1H,CHCO),6.46(s,1H,Ar-H),5.23(s,2H,OCH2-Ar),3.92(s,3H,ArOCH3),3.30(s,4H,N(CH2CH2)2NH),2.95(s,4H,N(CH2CH2)2NH)ppm.

第十步:化合物L1的制備

將中間體I-10(185mg,0.27mml)和Pd/C(60mg)加入到10mL四氫呋喃和10mL甲醇,密閉體系通入氫氣,35℃反應6h,TLC檢測(V乙酸乙酯:V甲醇=10:1)反應完全,靜止冷卻至室溫,抽濾,濾液減壓蒸除溶劑,硅膠柱層析(V乙酸乙酯:V甲醇=15:1)最終得到黃色固體78mg,產率77%。m.p.204~206℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated forC20H19NO6 369.1212,found 369.1271.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):=12.53(s,1H,5-OH),10.81(s,1H,7-OH),7.48(m,3H,Ar-H),7.20(d,1H,J=7.50Hz,Ar-H),7.05(s,1H,CHCO),6.30(s,1H,Ar-H),3.85(s,3H,ArOCH3),3.77(s,4H,N(CH2CH2)2O),3.23(s,4H,N(CH2CH2)2O)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):=182.1,163.4,157.3,156.2,151.5,149.6,131.6,129.8,127.6,118.7,116.7,112.2,105.0,103.7,99.0,66.0,61.0(2×C),48.0(2×C)ppm.IR(KBr)ν3245,2829,1657,1586,1507,1444,1356,1251,1163,1023,1010,863,837,699,671cm-1.

實施例2-實施例10所述化合物的制備,可參考實施例1中所描述的方法和路線制備得到。

實施例2:化合物L2

m.p.150~153℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C23H26N2O5 410.1842,found410.1907.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.62(s,1H,5-OH),7.32(m,3H,Ar-H),6.95(d,1H,J=6.0Hz,Ar-H),6.91(s,1H,CHCO),6.26(s,1H,Ar-H),4.45(m,1H,CH(CH3)2),3.60(s,4H,Ar-N(CH2)2),2.95(s,2H,NHCH2),2.73(s,2H,NHCH2),1.89(m,2H,NCH2CH2CH2NH),1.28(d,6H,J=6.00Hz,CH(CH3)2)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ=181.8,163.5,159.8,156.0,150.0,148.6,131.9,130.0,125.2,114.9,113.2,108.1,104.5,102.8,99.5,73.9,50.7,48.6,47.2,46.8,28.0,22.3(2×C)ppm.IR(KBr)ν3445,2970,1652,1593,1497,1370,1322,1192,1109,1031,842,699,576,548cm-1.

實施例3:化合物L3

m.p.240~242℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C25H28N2O5 436.1998,found436.2065.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.58(s,1H,5-OH),10.73(s,1H,7-OH),7.44(m,3H,Ar-H),7.18(d,1H,J=7.2Hz,Ar-H),7.03(s,1H,CHCO),6.33(s,1H,Ar-H),4.83(m,1H,CH(CH2)4),3.25(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),2.50(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),2.26(s,3H,NCH3),1.68(m,8H,CH(CH2)4)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ=182.1,163.4,157.8,155.8,151.4,150.0,131.5,129.8,125.4,118.8,116.6,112.4,104.9,103.7,99.1,84.0,54.4(2×C),47.7(2×C),45.6,32.3(2×C),23.2(2×C)ppm.IR(KBr)ν3441,2952,1651,1597,1496,1432,1375,1328,1260,1006,930,862,788,700,571cm-1.

實施例4:化合物L4

m.p.190~195℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C20H20N2O5 368.1372,found368.1439.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.56(s,1H,5-OH),7.89(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.14(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.82(s,1H,CHCO),6.35(s,1H,Ar-H),3.98(s,3H,ArOCH3),3.20(s,4H,N(CH2CH2)2NH),2.90(s,4H,N(CH2CH2)2NH)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ=182.1,163.3,158.5,156.2,151.8,149.6,127.8(2×C),118.8,116.3,113.3(2×C),104.8,103.1,99.3,60.8,48.6(2×C),45.2(2×C)ppm.IR(KBr)ν3537,2953,1643,1605,1575,1482,1443,1386,1215,1186,1124,992,837,670,553cm-1.

實施例5:化合物L5

m.p.190~195℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C21H22N2O5 382.1529,found382.1599.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.70(s,1H,5-OH),10.91(s,1H,7-OH),7.82(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.99(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.57(s,1H,CHCO),6.43(s,1H,Ar-H),4.05(s,3H,ArOCH3),3.44(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),3.01(s,3H,NCH3),2.43(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ=182.3,167.8,157.5,156.1,150.9,149.6,127.3(2×C),118.5,116.4,113.0(2×C),105.1,103.7,99.1,61.0,52.1(2×C),45.5(2×C),42.2ppm.IR(KBr)ν3430,2854,2648,1653,1454,1367,1228,1210,1026,921,837,780,692,583cm-1.

實施例6:化合物L6

m.p.207~210℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C22H24N2O6 412.1634,found412.1701.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.76(s,1H,5-OH),7.92(d,2H,J=8.90Hz,Ar-H),7.10(d,2H,J=8.90Hz,Ar-H),6.80(s,1H,CHCO),6.31(s,1H,Ar-H),3.88(s,3H,ArOCH3),3.59(t,2H,J=6.00Hz,NCH2CH2OH),3.37(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),2.60(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),2.49(t,2H,J=6.00Hz,NCH2CH2OH)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ=181.7,163.6,157.0,156.2,153.1,149.3,127.7,127.5(2×C),118.9,114.0,113.9,103.4,101.8,98.9,60.9,60.1,58.5,52.8(2×C),46.6(2×C)ppm.IR(KBr)ν3380,2825,1656,1608,1580,1505,1392,1235,1207,1163,1102,1015,946,819,663cm-1.

實施例7:化合物L7

m.p.210~213℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C22H24N2O5 396.1685,found396.1710.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.75(s,1H,5-OH),7.90(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.08(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.76(s,1H,CHCO),6.27(s,1H,Ar-H),4.38(m,1H,CH(CH3)2),3.28(s,4H,N(CH2CH2)2NH),2.84(s,4H,N(CH2CH2)2NH),1.30(d,6H,J=6.09Hz,CH(CH3)2)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ=182.0,164.4,156.3,152.1,151.1,149.8,127.6(2×C),125.1,119.0,113.1(2×C),103.4,101.7,98.8,73.8,50.7(2×C),46.6(2×C),22.3(2×C)ppm.IR(KBr)ν3379,2813,1616,1525,1506,1368,1262,1237,1119,1026,821,663,595cm-1.

實施例8:化合物L8

m.p.240~242℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C23H26N2O5 410.1842,found410.1890.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.76(s,1H,5-OH),10.59(s,1H,7-OH),7.92(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.11(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.79(s,1H,CHCO),6.28(s,1H,Ar-H),4.37(m,1H,CH(CH3)2),3.34(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),3.34(s,3H,NCH3),2.45(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),1.30(d,6H,J=6.09Hz,CH(CH3)2)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ=181.0,167.8,157.5,156.1,150.9,149.6,127.3(2×C),118.5,116.4,113.0(2×C),105.1,103.7,99.1,74.0,52.1(2×C),45.5(2×C),42.2,22.1(2×C)ppm.IR(KBr)ν3430,2854,2648,1653,1454,1367,1228,1210,1026,921,837,780,692,583cm-1.

實施例9:化合物L9

m.p.265~268℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C23H24N2O6 424.1634,found424.1707.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.73(s,1H,5-OH),10.56(s,1H,7-OH),8.11(s,1H,NCHO),7.94(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.15(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.81(s,1H,CHCO),6.29(s,1H,Ar-H),4.38(m,1H,CH(CH3)2),3.52(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),3.40(m,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),1.30(d,6H,J=6.15Hz,CH(CH3)2)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ=181.9,164.1,163.5,161.0,157.6,155.9,152.8,127.8,127.6(2×C),119.6,114.6(2×C),103.4,102.0,98.9,74.8,47.7,46.4,44.1(2×C),22.3(2×C)ppm.IR(KBr)ν3080,2972,1656,1574,1516,1433,1368,1277,1230,1202,1098,1003,968,847,825,658,559cm-1.

實施例10:化合物L10

m.p.160~168℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C26H30N2O5 450.2188,found450.2243.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.90(s,1H,5-OH),7.88(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.90(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.72(s,1H,CHCO),6.30(s,1H,Ar-H),4.10(m,1H,CH(CH2)5),3.65(s,4H,Ar-N(CH2)2),3.00(s,2H,NHCH2),2.83(s,2H,NHCH2),1.90(m,2H,NCH2CH2CH2NH),1.77(m,4H,CH(CH2)5),1.52(m,2H,CH(CH2)5),1.23(m,4H,CH(CH2)5)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ=181.5,163.6,158.6,155.3,153.6,149.5,127.8(2×C),125.1,118.8,113.3,111.4,109.0,103.6,98.9,81.0,60.1,50.9(2×C),47.2,46.9,33.9,27.8,26.3(2×C),23.9ppm.IR(KBr)ν3217,1654,1516,1400,1105,859,546cm-1.

實施例11-實施例15所述化合物的前七步中間體的制備,可參考實施例1中所描述的方法和路線制備得到。

實施例11:化合物L11

第八步:中間體II-9的制備

將中間體I-7(6g,13.6mmol)加入到30mL DMF,室溫攪拌溶解,再加入5.7g K2CO3(41mmol),室溫條件下滴加硫酸二甲酯(1.9g,15mmol),5min左右滴加完畢,80℃繼續反應10h,TLC檢測(V二氯甲烷:V甲醇=10:1)反應完全,靜止冷卻至室溫,抽濾,濾餅用20mL甲醇洗滌,濾液用6M HCl調pH=1-2,室溫攪拌過夜,用300mL冰水稀釋,析出大量固體。抽濾,濾餅烘干,粗品用甲醇和二氯甲烷的混合溶劑重結晶得黃色固1.0g,收率28%。m.p.155~158℃.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.56(s,1H,5-OH),9.02(s,1H,8-OH),8.26(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.46(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.01(s,1H,CHCO),6.60(s,1H,Ar-H),3.96(s,3H,OCH3)ppm.

第九步:中間體II-10的制備

將中間體II-9(3g,10mmol)加入到20mL DMF,室溫攪拌溶解,再加入3.45g K2CO3(25mmol)和1.85g溴代異丙烷(15mmol),80℃反應8h,TLC檢測(V石油醚:V乙酸乙酯=1:1)反應完全,反應液趁熱倒入10倍體積的冰水中,析出固體,靜止2h,抽濾,烘干,粗品用乙醚和丙酮的混合溶劑重結晶,得黃色固體1.8g,收率52.3%。m.p.158~160℃.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.59(s,1H,5-OH),8.15(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.50(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.02(s,1H,CHCO),6.62(s,1H,Ar-H),4.30(m,1H,CH(CH3)2),3.89(s,3H,OCH3),1.36(d,6H,J=6.00Hz,CH(CH3)2)ppm.

第十步:化合物L11的制備

將中間體II-10(100mg,0.29mmol)加入到10mL無水DMSO,升溫至60℃,攪拌溶解,再在N2保護下依次加入250mg哌嗪(2.90mmol)和375mg DIEA(2.90mmol),80℃反應8h,TLC檢測(V石油醚:V乙酸乙酯=2:1)反應完全,反應液趁熱倒入10mL飽和食鹽水中,靜止3h,抽濾,濾餅用10mL水洗滌,烘干得粗品90mg,粗品用甲醇和丙酮的混合溶劑重結晶,得黃色固體64mg,收率54%。m.p.190~192℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C23H26N2O5 411.1914,found 411.1917.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.89(s,1H,5-OH),7.91(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.07(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.79(s,1H,CHCO),6.55(s,1H,Ar-H),4.32(m,1H,CH(CH3)2),3.90(s,3H,OCH3),3.28(s,4H,N(CH2CH2)2NH),2.82(s,4H,N(CH2CH2)2NH),1.30(d,6H,J=6.00Hz,CH(CH3)2)ppm.13CNMR(75MHz,DMSO-d6):δ=181.9,164.0,158.6,156.4,153.6,149.1,127.7(2×C),126.0,118.5,113.8(2×C),103.8,101.5,95.8,75.2,56.4,47.7(2×C),45.3(2×C),22.4(2×C)ppm.IR(KBr)ν3350,2938,1650,1606,1580,1513,1380,1265,1204,1105,1069,1001,828,667,590cm-1.

實施例12-實施例13所述化合物的的制備,可參考實施例11中所描述的方法和路線制備得到。

實施例12:化合物L12

m.p.160~168℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C24H28N2O5 425.2071,found425.2074.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.88(s,1H,5-OH),7.92(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.10(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.80(s,1H,CHCO),6.55(s,1H,Ar-H),4.32(m,1H,CH(CH3)2),3.89(s,3H,OCH3),3.63(s,4H,N(CH2CH2)2NH),3.35(s,4H,N(CH2CH2)2NH),2.27(s,3H,NCH3),1.29(d,6H,J=6.00Hz,CH(CH3)2)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ=181.9,164.0,158.6,156.4,153.2,149.1,127.7(2×C),126.0,118.8,114.0(2×C),103.8,101.2,95.8,74.6,56.4,54.4(2×C),47.8(2×C),45.6,22.2(2×C)ppm.IR(KBr)ν3455,2971,2851,1654,1581,1519,1365,1323,1276,1253,1103,1006,944,850,806,591cm-1.

實施例13:化合物L13

m.p.200~202℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C24H28N2O5 425.2071,found425.2074.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=13.04(s,1H,5-OH),7.87(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.87(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.72(s,1H,CHCO),6.53(s,1H,Ar-H),4.32(m,1H,CH(CH3)2),3.89(s,3H,OCH3),3.63(s,4H,Ar-N(CH2)2),3.56(s,2H,NHCH2),2.86(s,2H,NHCH2),2.63(m,2H,NCH2CH2CH2NH),1.29(d,6H,J=6.00Hz,CH(CH3)2)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ=181.8,163.5,159.8,156.0,151.0,149.6,128.7(2×C),126.0,118.8,114.0(2×C),103.8,101.2,95.8,73.9,56.4,50.7,48.6,47.2,46.8,28.0,22.3(2×C)ppm.IR(KBr)ν3217,1654,1516,1400,1105,859,546cm-1.

實施例14所述化合物的前九步中間體的制備,可參考實施例1和實施例11中所描述的方法和路線制備得到。

實施例14:化合物L14

第十步:中間體II-11的制備

中間體19(500mg,1.35mmol)和5mL DMF加入10mL耐壓瓶中,室溫攪拌溶解,微波反應(功率:300W),升溫至240℃反應30min。TLC檢測(V石油醚:V乙酸乙酯=2:1)反應完全,反應液倒入10mL冰水中,靜止3h,析出固體,抽濾,濾餅烘干的黃色固體400mg,收率80%.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.90(s,1H,5-OH),10.59(s,1H,7-OH),7.89(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.21(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.94(s,1H,CHCO),5.90(m,1H,-CH=CH2),5.43(m,2H,-CH=CH2),4.45(m,1H,CH(CH3)2),3.31(d,J=5.70Hz,2H,-CH2CH=CH2),1.29(d,6H,J=6.00Hz,CH(CH3)2)ppm.

第十步:化合物L14的制備

將中間體II-11(100mg,0.27mmol)加入到8mL無水DMSO中,升溫至60℃,攪拌溶解,再在N2保護下依次加入116mg 4-甲基哌嗪(3.5mmol)和70mg DIEA(0.54mmol),80℃反應24h,TLC檢測(V石油醚:V乙酸乙酯=2:1)反應完全,反應液趁熱倒入10mL飽和食鹽水中,靜止3h,抽濾,濾餅用10mL水洗滌,烘干得粗品120mg,粗品用甲醇和二氯甲烷的混合溶劑重結晶,得黃色固體66mg,收率56%。m.p.203~208℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C26H30N2O5451.2188,found 451.2263.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=13.1(s,1H,5-OH),10.59(s,1H,7-OH),7.90(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.89(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.80(s,1H,CHCO),5.91(m,1H,-CH=CH2),4.96(m,2H,-CH=CH2),4.40(m,1H,CH(CH3)2),3.35(s,4H,N(CH2CH2)2NH),3.31(d,J=5.70Hz,2H,-CH2CH=CH2),2.48(s,4H,N(CH2CH2)2NH),2.25(s,3H,NCH3),1.32(d,6H,J=6.00Hz,CH(CH3)2)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ=181.6,163.2,158.3,155.5,153.7,151.1,147.6,135.8,127.5,124.4,118.9,116.4,114.5,113.9,111.4,109.2,101.8,75.2,51.8,51.3,49.3,48.7,46.6,27.7,22.1,21.8ppm.IR(KBr)ν3128,1647,1605,1582,1514,1480,1400,1224,1108,1007,823,546cm-1.

實施例15所述化合物的前十步中間體的制備,可參考實施例1和實施例11中所描述的方法和路線制備得到。

實施例15:化合物L15

m.p.165~170℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C26H33N3O5 468.2454,found468.2496.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=13.5(s,1H,5-OH),7.86(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.86(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.60(s,1H,CHCO),4.46(m,1H,CH(CH3)2),3.87(s,2H,CH2N(CH3)2),3.60(s,4H,Ar-N(CH2)2),2.82(s,2H,NHCH2),2.77(s,2H,NHCH2),2.56(s,6H,CH2N(CH3)2),1.91(m,2H,NCH2CH2CH2NH),1.27(d,6H,J=6.00Hz,CH(CH3)2)ppm.13CNMR(75MHz,DMSO-d6):δ=181.5,163.1,153.8,153.1,149.2,133.3,130.5,127.6,127.3,127.1,119.5,114.0,102.9,101.1,99.8,73.5,53.6,52.3,51.8,50.6,48.2,47.0,45.6,28.9,22.5,22.4ppm.IR(KBr)ν3126,1654,1577,1517,1400,1112,859,545cm-1.

實施例16-實施例25所述化合物的制備,可參考實施例1中所描述的方法和路線制備得到。

實施例16:化合物L16

m.p.200~205℃.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.75(s,1H,5-OH),7.92(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.07(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.76(s,1H,CHCO),6.30(s,1H,Ar-H),4.87(m,1H,OCH(CH2)2),3.42(m,4H,CHCH2N&CHCH2CH2N),3.20(s,4H,N(CH2CH2)2NH),3.07(s,4H,N(CH2CH2)2NH),2.10(m,2H,CHCH2CH2N).13C NMR(75MHz,DMSO-d6):182.0,163.1,159.0,156.0,151.9,150.0,131.6,129.8,125.2,118.8,116.4,112.2,104.7,103.2,99.3,74.3,48.8(2×C),45.2(2×C),22.3(2×C)ppm.IR(KBr)ν3132,2970,1654,1603,1512,1073,547cm-1.

實施例17:化合物L17

m.p.250~252℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C26H32N3O5 466.2338,found466.2335.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.70(s,1H,5-OH),7.77(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),3.96(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.52(s,1H,CHCO),6.28(s,1H,Ar-H),4.29(m,1H,Ar-OCH),3.38(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),2.97(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),2.59(t,2H,J=6.00Hz,CH2NCH3),2.37(s,3H,NCH3),2.09(s,3H,CH2NCH3),2.60(t,2H,J=6.00Hz,CH2NCH3),1.76(m,4H,OCH(CH2)2)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ=182.28,163.82,157.90,157.49,153.27,149.77,127.58,124.75,120.52,114.46,104.48,103.04,99.46,77.24,54.69,52.63,47.30,46.11,45.45,30.75ppm.IR(KBr)ν3441,2952,1597,1496,1432,1375,1328,1260,1006,930,862,788,699cm-1.

實施例18:化合物L18

m.p.190~195℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C25H24N2O6 449.1707,found449.1702.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.78(s,1H,5-OH),7.81(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.34(s,1H,Ar-H),6.72(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.64(s,1H,CHCO),6.38(s,1H,Ar-H),6.26(m,2H,Ar-H),4.98(s,2H,OCH2-Ar),3.66(s,4H,Ar-N(CH2)2),3.07(s,2H,NHCH2),2.86(s,2H,NHCH2),1.95(m,2H,NCH2CH2CH2NH)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ=181.98,163.60,157.56,156.24,153.42,151.76,148.70,143.74,127.74,124.60,119.72,112.76,110.66,107.52,104.36,101.39,99.30,66.82,58.02,49.24,48.44,47.12,28.96ppm.IR(KBr)ν3440,2927,1652,1598,1499,1368,1026,838,772,690,591cm-1.

實施例19:化合物L19

m.p.195~198℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C24H24N4O5 449.1780,found449.1792.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.80(s,1H,5-OH),11.88(s,1H,-NH-N=),10.84(s,1H,7-OH),7.63(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.00(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.78(s,1H,CHCO),6.31(s,1H,Ar-H),3.41(s,4H,N(CH2CH2)2NH),2.51(s,4H,N(CH2CH2)2NH),2.00(s,6H,Ar-CH3)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ=181.6,163.6,156.6,156.5,153.1,148.5,138.2,127.6(2×C),125.0,118.8,113.9(2×C),103.0,102.1,98.9,54.2(2×C),46.4(2×C),9.8ppm.IR(KBr)ν3407,1653,1587,1567,1514,1375,1222,1203,1107,1000,823,566,450cm-1.

實施例20:化合物L20

m.p.177~180℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C25H26N4O5 463.1937,found463.1972.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.80(s,1H,5-OH),11.85(s,1H,-NH-N=),7.63(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.01(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.78(s,1H,CHCO),6.33(s,1H,Ar-H),3.40(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),2.44(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),2.23(s,3H,NCH3),1.98(s,6H,Ar-CH3)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ=181.6,163.6,156.6,156.5,153.1,148.5,138.2,127.6(2×C),125.0,118.8,113.9(2×C),103.0,102.1,98.9,54.2(2×C),46.4(2×C),9.8(2×C)ppm.IR(KBr)ν3419,1654,1587,1567,1383,1236,1221,1106,1001,882,566,453cm-1.

實施例21:化合物L21

m.p.200~202℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C23H22N4O6 451.1573,found451.1596.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.70(s,1H,5-OH),10.97(s,1H,7-OH),7.88(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.07(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.64(s,1H,CHCO),6.51(s,1H,Ar-H),5.94(s,1H,-NH-CH=C),4.52(s,1H,-NH-CH=C),3.33(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),2.44(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),2.22(s,3H,NCH3)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):182.1,165.9,163.6,159.0,150.3,147.7,131.0,128.8,127.3(2×C),121.7,111.7(2×C),104.5,103.7,99.0,57.2(2×C),52.0(2×C),46.6ppm.IR(KBr)ν3415,2972,1652,1587,1514,1379,1235,1203,1051,1004,827,664,559cm-1.

實施例22:化合物L22

m.p.178~180℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C23H22N4O5S 467.1344,found467.1362.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.99(s,1H,5-OH),10.70(s,1H,7-OH),7.93(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.12(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.93(s,1H,CHCO),6.74(s,1H,Ar-H),6.61(m,3H,Ar-H&NH2),3.44(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),2.59(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),2.32(s,3H,NCH3)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):182.1,168.9,163.6,161.8,160.8,152.7,137.7,130.5,126.9,127.3(2×C),111.7(2×C),108.0,104.5,104.0,99.3,57.2(2×C),52.0(2×C),46.6ppm.IR(KBr)ν3392,1655,1601,1512,1356,1209,1109,825,701,467cm-1.

實施例23:化合物L23

m.p.164~168℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C26H28N4O6 493.2042,found493.2083.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.80(s,1H,5-OH),11.92(s,1H,-NH-N=),10.93(s,1H,7-OH),7.63(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.00(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.78(s,1H,CHCO),6.30(s,1H,Ar-H),4.50(s,1H,NCH2CH2OH),3.54(m,2H,NCH2CH2OH),3.33(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),2.55(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),2.44(t,2H,J=6.00Hz,NCH2CH2OH),1.97(s,6H,Ar-CH3)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):181.6,163.7,156.6,156.5,153.1,148.5,138.0,127.6(2×C),125.0,118.7,113.7(2×C),103.0,101.9,98.9,60.1,58.5,52.8(2×C),48.6,46.5(2×C),10.1(2×C)ppm.IR(KBr)ν3412,2914,1654,1584,1513,1370,1223,1203,1106,1000,824,562cm-1.

實施例24:化合物L24

m.p.250~258℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C29H27N5O5 526.2012,found526.2083.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.80(s,1H,5-OH),11.91(s,1H,-NH-N=),10.95(s,1H,7-OH),8.15(m,1H,Ar-H),7.66(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.57(m,1H,Ar-H),7.06(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),6.89(m,1H,Ar-H),6.80(s,1H,CHCO),6.68(m,1H,Ar-H),6.32(s,1H,Ar-H),3.66(s,4H,Ph-N(CH2CH2)2N),3.48(s,4H,Ph-N(CH2CH2)2N),1.99(s,6H,Ar-CH3)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):181.6,163.7,158.7,156.5(2×C),153.0,148.5,147.6,137.9,137.6,127.7(2×C),124.9,118.9,113.8,113.2,107.2,103.1,102.0,98.8,46.2(2×C),44.1(2×C),8.4(2×C)ppm.IR(KBr)ν3411,3167,2360,1652,1584,1563,1508,1434,1354,1227,1202,1103,998,953,844,818,773cm-1.

實施例25:化合物L25

m.p.200~202℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C29H26N4O7 543.1835,found543.1861.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.79(s,1H,5-OH),11.92(s,1H,-NH-N=),10.96(s,1H,7-OH),7.88(s,1H,Ar-H),7.65(d,2H,J=9.00Hz,Ar-H),7.04(m,3H,Ar-H),6.80(s,1H,CHCO),6.66(m,,1H,Ar-H),6.31(s,1H,Ar-H),3.82(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),3.47(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),1.98(s,6H,Ar-CH3)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):181.6,163.6,158.3,156.6,156.5,152.7,148.5,146.9,144.9,137.9,127.7(2×C),124.9,119.1,119.0,115.9,114.0,113.8,111.4,103.1,102.1,98.9,59.9(2×C),46.5(2×C),10.0(2×C)ppm.IR(KBr)ν3392,3163,2923,1581,1515,1433,1368,1279,1227,1103,1012,825,755,559cm-1.

實施例26-實施例27所述化合物的制備,可參考實施例1和實施例11中所描述的方法和路線制備得到。

實施例26:化合物L26

m.p.200~203℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C26H28N4O5 477.2093,found477.2124.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.94(s,1H,5-OH),11.90(s,1H,-NH-N=),7.72(d,2H,J=8.60Hz,Ar-H),7.04(d,2H,J=8.60Hz,Ar-H),6.86(s,1H,CHCO),6.61(s,1H,Ar-H),3.88(s,3H,ArOCH3),3.40(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),2.60(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),2.35(s,3H,NCH3),1.96(s,6H,Ar-CH3)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):182.3,172.5,164.4,158.2,157.5,148.3,138.3,137.0,128.7,128.2,126.1,123.5,114.5,104.0,102.5,96.4,57.1,54.2(2×C),46.4(2×C),9.1(2×C)ppm.IR(KBr)ν3425,2936,1656,1600,1514,1432,1375,1339,1223,1206,1126,999,816,661,567cm-1.

實施例27:化合物L27

m.p.210~212℃.HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C25H26N4O5 463.1937,found463.1973.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=12.94(s,1H,5-OH),11.89(s,1H,-NH-N=),7.72(d,2H,J=8.60Hz,Ar-H),7.02(d,2H,J=8.60Hz,Ar-H),6.85(s,1H,CHCO),6.61(s,1H,Ar-H),3.88(s,3H,ArOCH3),3.32(s,4H,Ar-N(CH2CH2)2N),2.90(s,2H,Ar-N(CH2CH2)2N),2.71(s,2H,Ar-N(CH2CH2)2N),1.95(s,6H,Ar-CH3)ppm.13C NMR(75MHz,DMSO-d6):181.8,163.8,157.7,157.0,147.8,137.8,127.9,127.7(2×C),125.6,118.9,114.0,103.5,102.0,95.9,56.5,46.1,45.5,45.4,44.1,9.5(2×C)ppm.IR(KBr)ν3410,2923,1655,1598,1513,1373,1224,1205,1124,999,825,567cm-1.

實施例28-實施例40所述化合物的前四步中間體的制備,可參考實施例1中所描述的方法和路線制備得到。

實施例28:化合物L28

第五步:中間體VI-6的制備

將中間體I-5(15g,50mmol)加入到75mL無水DMF,冰浴至0℃,攪拌溶解,再加入NBS(8.93g,50mmol),緩慢升溫至室溫繼續反應2h,TLC檢測(V石油醚:V乙酸乙酯=1:2)反應完全,抽濾,濾餅用10mL甲醇洗滌。取出濾餅用20mL甲醇打漿,抽濾,濾餅干燥至恒重的白色固體15.36g,收率80%。

第六步:中間體VI-7的制備

將中間體VI-6(2g,4.26mmol)、吡咯烷(8.72mmol)、CsCO3(2.84g,8.72mmol)、(Pd)2(dba)3(120mg,0.13mmol)和rac-BINAP(244mg,0.39mmol)加入50mL甲苯中,在N2保護下回流36h。TLC檢測(V乙酸乙酯:V二氯甲烷=20:1)反應完全,緩慢冷卻至室溫,減壓蒸餾得到深棕色粘稠固體。固體用20ml二氯甲烷分散,用甲磺酸水溶液調至pH=4-5,靜置,分液得水層。水層用NaHCO3水溶液調至pH=8-9,用20mL二氯甲烷萃取,二氯甲烷層用無水Na2SO4干燥,抽濾,濾液減壓蒸餾得到黃棕色固體,干燥至恒重得黃棕色固體218mg,收率10.73%。

第七步:中間體VI-8的制備

將中間體VI-7(218mg,0.57mmol)溶于2mL二氯甲烷中,冰浴降至0℃以下。在N2保護下加入三溴化硼(0.27mL,2.85mmol),撤去冰浴,緩慢升至室溫反應1h。TLC檢測(V二氯甲烷:V甲醇=15:1)反應完全。在冰浴條件下緩慢滴加10mL甲醇淬滅反應,減壓蒸餾得棕色粗品。粗品用10mL二氯甲烷溶解,用NaHCO3水溶液調至pH=8-9,靜置分液,二氯甲烷層用10mL飽和NaCl水溶液洗滌,無水Na2SO4干燥,抽濾,濾液減壓蒸餾,得淡黃色固體183mg,收率86.8%;HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C20H20FN2O4371.1407,found 371.1397;1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.23(q,J=6.00Hz,2H,Ar-H),7.48(t,J=9.00Hz,2H,Ar-H),7.03(s,1H,Ar-H),6.55(s,1H,Ar-H),3.91(s,3H,-OCH3),3.02(m,8H,-CH2-).

第八步:化合物L28的制備

將中間體VI-8(174mg,0.49mmol),1-甲基哌嗪(490mg,4.9mmol),DIPEA(632mg,4.9mmol)溶于2mL DMSO中,升溫至120-130℃反應1.5h。TLC檢測(V二氯甲烷:V甲醇=10:1)反應完全。冷卻至室溫,緩慢滴加10mL H2O淬滅反應,用二氯甲烷萃取,二氯甲烷層用10mL飽和食鹽水洗滌,無水Na2SO4干燥,抽濾,濾液減壓蒸餾,過柱純化的淡黃色固體163mg,收率73.9%;HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C25H30N3O4 436.2236,found436.2243;76.5%;1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):13.10(d,1H,Ar-OH),7.91(q,J=6.00Hz,2H,Ar-H),7.08(t,J=9.00Hz,2H,Ar-H),6.80(t,J=12.00Hz,1H,Ar-H),6.44(d,J=42.00Hz,1H,Ar-H),3.88(s,3H,-OCH3),3.35(m,8H,-N-CH2-),3.21(s,2H,-CH2-),2.50(d,4H,-CH2-),2.25(s,3H,-CH3),1.97(s,2H,-CH2-).

實施例29-實施例40所述化合物的制備,可參考實施例28中所描述的方法和路線制備得到。

實施例29:化合物L29

HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C25H30N3O5 452.2185,found 452.2196;1H NMR(300MHz,chloroform-d)δ(ppm):13.02(s,1H,Ar-OH),7.93(d,J=6.00Hz,2H,Ar-H),7.03(d,J=9.00Hz,2H,Ar-H),6.58(s,1H,Ar-H),6.40(s,1H,Ar-H),3.92(s,3H,O-CH3),3.89(t,J=3.00Hz,4H,-O-CH2-),3.50(t,J=6.00Hz,4H,-N-CH2-),3.20(t,J=9.00Hz,4H,-N-CH2-),2.70(t,J=6.00Hz,4H,-N-CH2-),2.47(s,3H,-CH3).

實施例30:化合物L30

HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C25H28N5O4 462.2141,found 462.2158;1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.53(d,J=9.00Hz,2H,Ar-H),7.35(s,1H,N-CH=),6.90(d,J=9.00Hz,2H,Ar-H),6.69(s,1H,Ar-H),6.54(s,1H,-C-CH=),5.48(d,J=3.00Hz,1H,Ar-H),3.85(s,3H,-N-CH3),3.53(s,3H,-OCH3),3.29(m,4H,-CH2-),2.51(m,4H,-CH2-),2.21(s,3H,-CH3).

實施例31:化合物L31

HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C26H32N3O4 450.2393,found 450.2392;1H NMR(300MHz,MeOH-d)δ(ppm):7.85(d,J=9.00Hz,2H,Ar-H),6.98(d,J=9.00Hz,2H,Ar-H),6.47(s,1H,Ar-H),6.36(s,1H,Ar-H),3.85(s,3H,-OCH3),3.32(s,4H,-N-CH2-),3.25(d,J=3.00Hz,4H,-N-CH2-),3.00(s,4H,-N-CH2-),2.54(d,J=3.00Hz,4H,-N-CH2-),2.30(s,3H,-NCH3).

實施例32:化合物L32

HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C25H31N4O4 451.2345,found 451.2330;1H NMR(300MHz,chloroform-d)δ(ppm):12.99(s,1H,Ar-OH),7.94(d,J=9.00Hz,2H,Ar-H),7.02(d,J=9.00Hz,2H,Ar-H),6.95(s,1H,Ar-H),6.37(s,1H,Ar-H),3.90(s,3H,-OCH3),3.45(s,4H,-N-CH2-),3.10(s,4H,-N-CH2-),2.66(s,4H,-N-CH2-),2.43(s,3H,-N-CH3),1.71(m,6H,-CH2-).

實施例34:化合物L34

HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C21H21FNO5 386.1404,found 386.1418;1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):12.88(s,1H,Ar-OH),8.21(q,J=6.00Hz,2H,Ar-H),7.49(t,J=9.00Hz,2H,Ar-H),7.02(s,1H,Ar-H),6.55(s,1H,Ar-H),4.67(s,1H,-C-OH),3.90(s,3H,-OCH3),3.71(m,1H,-CH-),2.92(m,4H,-CH2-),1.71(m,4H,-CH2-).

實施例35:化合物L35

HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C22H24FN2O4 399.1720,found 399.1731;1HNMR(300MHz,chloroform-d)δ(ppm):12.80(s,1H,Ar-OH),8.02(t,J=6.00Hz,2H,Ar-H),7.25(d,J=9.00Hz,2H,Ar-H),6.63(s,1H,Ar-H),6.40(s,1H,Ar-H),3.91(s,3H,-OCH3),3.05(m,4H,-CH2-),2.85(m,2H,-CH-),1.12(d,J=6.00Hz,6H,-CH3),0.89(d,J=9.00Hz,1H,-NH-).

實施例36:化合物L36

HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C23H24FN2O7S 491.1288,found 491.1293;1HNMR(300MHz,chloroform-d)δ(ppm):12.87(s,1H,Ar-OH),7.94(d,J=6.00Hz,2H,Ar-H),7.34(d,J=9.00Hz,2H,Ar-H),6.65(s,1H,Ar-H),6.43(s,1H,Ar-H),4.19(m,2H,-OCH2CH3),3.96(s,3H,-OCH3),3.50(m,8H,-CH2-),1.37(t,J=9.00Hz,3H,-CH3).

實施例37:化合物L37

HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C20H20FN2O5S 419.1077,found 419.1091;1HNMR(300MHz,chloroform-d)δ(ppm):12.85(s,1H,Ar-OH),7.97(q,J=3.00Hz,2H,Ar-H),7.29(d,J=18.00Hz,2H,Ar-H),6.64(s,1H,Ar-H),6.43(s,1H,Ar-H),3.95(s,3H,-OCH3),3.65(t,J=9.00Hz,4H,-CH2-),3.28(d,J=6.00Hz,4H,-CH2-).

實施例38:化合物L38

HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C24H29N4O4 437.2189,found 437.2154;1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.96(d,J=12.00Hz,2H,Ar-H),7.08(d,J=9.00Hz,2H,Ar-H),6.72(s,1H,Ar-H),6.47(s,1H,Ar-H),3.88(s,3H,-OCH3),3.75(s,8H,-CH2-),3.86(d,J=18.00Hz,8H,-CH2-).

實施例39:化合物L39

HRMS(ESI),[M+H]+calculated for C24H28N3O5 438.2029,found 438.2041;1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.00(d,J=12.00Hz,2H,Ar-H),7.09(t,J=6.00Hz,2H,Ar-H),6.77(s,1H,Ar-H),6.48(s,1H,Ar-H),3.87(s,3H,-OCH3),3.74(m,4H,-O-CH2-),3.03(t,J=6.00Hz,4H,-N-CH2-),2.86(t,J=3.00Hz,4H,-N-CH2-),2.51(s,4H,-N-CH2-).

實施例40:化合物L40

1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.00(d,J=9.00Hz,2H,Ar-H),7.00(d,J=9.00Hz,3H,Ar-H),6.79(s,1H,Ar-H),6.49(s,1H,Ar-H),3.89(s,3H,-OCH3),3.55(t,J=6.00Hz,5H,-N-CH2-),3.00(m,4H,-N-CH2-),2.90(q,J=6.00Hz,8H,-CH2-),2.48(q,J=6.00Hz,4H,-CH2-),1.85(d,J=12.00Hz,2H,-CH2-),1.45(m,2H,-CH2-).

下面是此發明部分化合物的生物藥理學實驗和結果:

一、本發明部分化合物對癌細胞的生長抑制活性

實驗材料:

a.MTT溶液的配置

將250mg MTT,加入到50mL滅菌后的1×PBS(0.01mol/L pH=7.4)中,避光攪拌30min,用0.22μm的微孔濾膜過濾,然后分裝于EP管中,-20℃避光保存。

b.細胞培養:

細胞株:HepG2、A549、HCT116和THP-1

細胞培養材料:DMEM液體培養基,1640液體培養基,10%胎牛血清,0.25%胰酶,1×PBS

c.其他:

分析純DMSO溶液,細胞計數板,96孔細胞培養板

實驗儀器:

酶聯免疫檢測儀

實驗步驟:

(1)鋪板

接種細胞:用0.25%胰酶將細胞消化,用含10%FBS的細胞培養基配成單個細胞懸液。以每孔4×103~104個細胞接種于96孔培養板中,每孔體積100μL。

培養細胞:將培養板放入細胞培養箱,37℃、5%二氧化碳及飽和濕度條件下,培養24小時。

(2)加藥

顯微鏡下觀察細胞已貼壁且呈正常生長形態,即可進行給藥:吸棄培養板中的舊培養液,加入含藥物的培養液繼續在細胞培養箱內培養72h。

(3)呈色

培養72h后,每孔加入20μL MTT溶液(5mg/mL),37℃繼續孵育4h,去除上清液,每孔加入150μL DMSO,震蕩10min,使甲瓚充分溶解。

(4)比色

492nm波長,在酶聯免疫檢測儀上測定各孔光吸收值,記錄實驗結果。

(5)實驗結果分析

實驗結果如下表所示。

表1本發明部分化合物對癌細胞的生長抑制活性

由表1可見,本發明大部分化合物對癌細胞均有較好的抑制活性,相對于漢黃芩素有很大的提高,活性較為突出的化合物主要有L26、L27、L32和L38。

二、本發明部分化合物對激酶CDK9和CDK2的抑制活性

實驗原理和實驗方法:

CDK9/cyclinT、CDK2/CyclinA復合物與底物肽8mM MOPS、0.2mM EDTA、10mM醋酸鎂和10μΜγ-[33P]-ATP一起孵育。加入Mg-ATP混合物后,室溫反應40分鐘,加入3%磷酸溶液中止反應。將反應液等分點樣到P30濾墊上,用75mM磷酸洗滌3次,每次5min;用甲醛洗滌1次。然后干燥并閃爍計數。通過在不同濃度的化合物存在的情況下,在60mM的HEPES-氫氧化鈉(pH 7.5)中3mM的氯化鎂,3mM的氯化錳,3μM的鈉-原釩,1.2mMDTT,50μg/mL PEG20000和1μM的ATP中將CDK9-cyclin T、CDK2-Cyclin A復合物與重組底物RBERCHK tide在30℃條件下孵育2h。通過使用磷酸化特異性抗體和western blot分析檢測磷酸化底物。

實驗結果如下表所示。

表2本發明部分化合物對激酶CDK9和CDK2的IC50值

NA表示化合物對CDK2沒有抑制活性。

由表2可見,本發明部分化合物相對漢黃芩素對CDK9具有較好的抑制活性,與Flavopiridol相當,但對CDK9的選擇性得到了明顯的提高。特別是化合物L26對CDK9的抑制活性與Flavopiridol基本相當,其IC50值達到了3.0nM,化合物L32對CDK9/CDK2的選擇性是漢黃芩53倍,是Flavopiridol的45倍。

三、本發明部分化合物對不同CDKs的選擇性

表3本發明部分化合物對不同CDKs的選擇性

由表3可見,相對于CDK家族其他激酶,本發明部分化合物對CDK9具有較好的抑制活性且對CDK9的選擇性也優于漢黃芩素以及臨床II期藥物Flavopiridol。

四、本發明部分化合物的類藥性參數

表4本發明部分化合物的類藥性參數

由表4可見,本發明優選化合物L27的溶解度較好,特別是在酸性條件下(pH=4.5)的溶解度相對于其他化合物得到了大幅度的提高在相同條件下其溶解度是漢黃芩素的500倍,Log D值也是處于合理的范圍內。

五、我們選取了活性較好的化合物L26,對其進行了誘導MV4-11細胞凋亡的實驗。

實驗方法:將處于對數生長期的MV4-11細胞接種于6孔板內,將L26化合物配制成不同的濃度梯度并給與細胞,24小時后收集細胞,PBS洗滌一次,然后加入細胞凋亡染色液,30分鐘后用流失細胞儀進行檢測。

結果如下:

圖1本發明中化合物L26誘導MV4-11細胞凋亡實驗結果

由圖1可見,化合物L26能夠以濃度依賴性的方式誘導MV4-11細胞凋亡,當化合物L26的濃度為1μM時可以使約40%的細胞發生凋亡。

六、我們用WB的方法對化合物L26的抗腫瘤作用機制進行了研究,我們考察了化合物L26對CDK9及其下游蛋白表達量的影響。

實驗方法:將處于對數生長期的MV4-11細胞接種于6孔板內,并給與不同濃度梯度的化合物L26,4小時后收集細胞,提取蛋白,以DMSO作為陰性對照,β-actin作為內參。

結果如下:

由圖2可見,化合物L26能通過抑制CDK9的活性,使得2位Ser磷酸化的RNA聚合酶II的表達量明顯減少,并能使其下游的短促凋亡蛋白Mcl-1的表達量呈濃度依賴性的減少,使Cleaver caspase 3的表達量呈濃度依賴性的增加。這表明了化合物L26是通過抑制CDK9的活性,使得下游的促凋亡蛋白的表達增加,進而引起細胞發生凋亡的。

再多了解一些
當前第1頁1 2 3 
網友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點贊!
1
做爱视频