MINDY1在宮頸病變疾病中的應用的制作方法

文檔序號:18145656發布日期:2019-07-10 11:47
MINDY1在宮頸病變疾病中的應用的制作方法

本發明屬于生物醫藥領域,涉及MINDY1在宮頸病變疾病中的應用,具體的所述疾病為宮頸上皮內瘤樣病變、宮頸癌。



背景技術:

宮頸癌是婦科最常見惡性腫瘤之一,居女性癌癥患者死亡原因的第4位。宮頸鱗癌在宮頸癌中所占比例為75%~80%。宮頸癌的發生演進是多因素共同作用的結果,其中HPV特別是高危型別的持續感染是宮頸癌發生及發展的主要病原學因素(Li N,Franceschi S,Howell-Jones R,Snijders PJ,Clifford GM.Human papillomavirus type distribution in 30,848 invasive cervical cancers worldwide:variation by geographical region,histological type and year of publication.International Journal of Cancer.2011,128(4):927-935.)。隨著宮頸癌篩查的普及和人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)疫苗的應用,宮頸癌的發病率及死亡率有所下降(Seoud M,Tjalma Ronsse V.Cervical adenocarcinoma:moving towards better prevention Vaccine-2011.291491:9148-9158),但是腫瘤的發生及發展是多因素共同作用的結果。在多數情況下,HPV感染可以被免疫系統清除,僅有少部分HPV持續感染者進展為宮頸癌(Wheeler CM,Hunt WC,Cuzick J,Langsfeld E,Robertson M,Castle PE.The Influence of type-specific humanpapillomavirus infections on the detection of cervical precancer cancer:A population-based study of opportunistic cervical screening in the united states.and Int J Cancer.2013,doi:10.1002.),表明除HPV感染外,宿主與細胞生長分化相關的基因表達異常在宮頸癌的發病機制中同樣具有重要作用。

正常的宮頸上皮發展為宮頸上皮內瘤變,進展至宮頸癌,需要經歷多個不同的病理階段,其中涉及多種分子事件,宮頸癌的發生發展應是宿主遺傳因素和HPV共同作用的結果。因此,對與宮頸鱗癌生長分化相關的基因及信號通路進行研究,可為宮頸癌的篩查,診斷和預后提供新的策略。

基因功能及結構研究的基礎和出發點為轉錄組的研究,RNA測序(RNA-Seq)是利用深度測序技術對細胞或組織進行轉錄組測序(Ramskold D,Luo S,Wang YC,Li R,Deng Q,Faridani OR,Danies GA,Khrebtukova I Loring JF,Laurent LC,Schroth GP,Sandberg R.Full-length mRNA-Seq from single-cell levels of RNA and individual circulating tumor cells.Nat Biotechnol.2012,30(8):777-782)。與傳統的芯片雜交平臺相比,RNA-Seq在檢測新基因,腫瘤組織的轉錄本分析,腫瘤組織與正常組織的差異基因等方面具有顯著的優勢。本發明通過對疾病患者的樣本進行高通量測序,尋找差異表達的基因,從而為宮頸癌的早期診斷和治療提供分子靶標以及理論依據。



技術實現要素:

為了彌補現有技術的不足,本發明的目的在于提供一種與宮頸疾?。簩m頸上皮內瘤樣病變、宮頸鱗癌發生發展相關的基因標志物。

本發明的目的之二在于提供生物標志物在宮頸上皮內瘤樣病變、宮頸鱗癌臨床診斷治療中的應用。

本發明的目的之三在于提供生物標志物在宮頸鱗癌臨床治療中的應用。

本發明的目的之四在于提供宮頸鱗癌的生物標志物在篩選治療宮頸鱗癌的藥物中的應用。

為了實現上述目的,本發明采用如下技術方案:

本發明的第一方面提供了一種試劑,所述試劑能夠檢測MINDY1基因或其表達產物的水平。

進一步,所述試劑包括:

特異性識別MINDY1基因的探針;或

特異性擴增MINDY1基因的引物;或

特異性結合MINDY1基因編碼的蛋白的抗體或配體。

進一步,特異性擴增MINDY1的引物序列如SEQ ID NO.1~2所示。

本發明的第二方面提供了一種試劑盒,所述試劑盒包括本發明第一方面所述的試劑。

本發明的第三方面提供了一種芯片,所述芯片包括本發明第一方面所述的試劑。

本發明的第四方面提供了一種核酸膜條,所述核酸膜條包括本發明第一方面所述的試劑。

本發明的第五方面提供了一種組合物,所述組合物包括MINDY1的促進劑,和/或藥學上可接受的載體。所述促進劑包括提高MINDY1基因或其表達產物穩定性、上調MINDY1基因或其表達產物的表達水平、增加MINDY1基因或其表達產物有效作用時間的物質;所述藥學上可接受的載體和/或輔料,包括(但不限于)稀釋劑、粘合劑、表面活性劑、致濕劑、吸附載體、潤滑劑、填充劑、崩解劑;所述藥物組合物還可以包括穩定劑、殺菌劑、緩沖劑、等滲劑、螯合劑、pH控制劑及表面活性劑等添加劑。

進一步,所述促進劑為含有MINDY1的載體。

本發明的第六方面提供了一種篩選治療宮頸鱗癌的候選藥物的方法,所述方法包括:

用待篩選物質處理表達或含有MINDY1基因或其編碼的蛋白的培養體系;和

檢測所述體系中MINDY1基因或其編碼的蛋白的表達或活性;

其中,若所述待篩選物質可以促進MINDY1基因的水平或表達活性,則表明該待篩選物質是治療宮頸鱗癌的候選藥物。

在本發明中,所述體系包括(但不限于):細胞體系、亞細胞體系、溶液體系、組織體系、器官體系或動物體系。

在本發明中,所述的步驟還包括:對獲得的候選藥物進行進一步的細胞實驗和/或動物試驗,以從候選藥物中進一步選擇可以治療宮頸鱗癌的藥物。

本發明的第七方面提供了如下任一項所述的應用:

a.本發明第一方面所述的試劑在制備早期診斷宮頸上皮內瘤樣病變、宮頸鱗癌的產品中的應用;

b.本發明第二方面所述的試劑盒在制備診斷宮頸上皮內瘤樣病變、宮頸鱗癌的產品中的應用;

c.本發明第三方面所述的芯片在制備診斷宮頸上皮內瘤樣病變、宮頸鱗癌的產品中的應用;

d.本發明第四方面所述的核酸膜條在制備診斷宮頸上皮內瘤樣病變、宮頸鱗癌的產品中的應用;

e.本發明第五方面所述的組合物在制備治療宮頸鱗癌的藥物中的應用;

f.本發明第六方面所述的方法在篩選治療宮頸鱗癌的候選藥物中的應用;

g.MINDY1在篩選治療宮頸鱗癌的候選藥物中的應用;

h.MINDY1在制備治療宮頸鱗癌的藥物中的應用。

附圖說明

圖1是利用QPCR檢測MINDY1基因在宮頸鱗癌患者中的表達情況;

圖2是MINDY1基因表達水平圖;

圖3是CCK-8法檢測MINDY1對細胞增殖活性的影響圖;

圖4是利用transwell小室檢測MINDY1基因對細胞遷移侵襲的影響圖,其中圖A是對細胞遷移的影響圖;圖B是對細胞侵襲的影響圖。

具體的實施方式

本發明通過高通量測序技術以及進行高通量測序分析,檢測宮頸上皮內瘤樣病變、宮頸鱗癌患者組織中的基因表達水平,發現其中表達具有明顯差異的基因,探討其與宮頸上皮內瘤樣病變、宮頸鱗癌的發生之間的關系,從而為宮頸鱗癌的早期檢測及靶向治療尋找更好的途徑和方法。經過篩選本發明首次發現了MINDY1在宮頸鱗癌患者中表達下調,并通過基因過表達技術進一步驗證了MINDY1參與宮頸癌細胞的增殖、侵襲過程,提示MINDY1可作為宮頸鱗癌的獨立預測因子,也可以和其他的基因標志物聯合應用。

MINDY1基因

本發明中的MINDY1的基因ID為55793,在本發明中,MINDY1包括野生型、突變型或其片段。本領域技術人員知道,在進行測序分析時,會將原始測序結果比對到人的參考基因組上,因此篩選結果中的MINDY1可能會包含不同的轉錄本,只要可以比對到參考基因組上的MINDY1(基因ID:55793)即可。目前已經公開的MINDY1有六個轉錄本,序列分別如NM_001040217.2、NM_001163258.1、NM_001163259.1、NM_001163260.1、NM_001319998.1、NM_018379.4所示。在本發明中,一種代表性的MINDY1基因序列如NM_001040217.2所示。

本發明的MINDY1核苷酸全長序列或其片段通??梢杂肞CR擴增法、重組法或人工合成的方法獲得。

本發明可以利用本領域內已知的任何方法測定基因表達。本領域技術人員應當理解,測定基因表達的手段不是本發明的重要方面??梢栽谵D錄水平或翻譯水平上檢測生物標志物的表達水平。

本發明的基因和蛋白使用本領域普通技術人員已知的多種技術進行檢測,這些技術包括但不限于:核酸測序、核酸雜交、核酸擴增技術、蛋白免疫技術。

所述核酸擴增技術選自聚合酶鏈式反應(PCR)、逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)、轉錄介導的擴增(TMA)、連接酶鏈式反應(LCR)、鏈置換擴增(SDA)和基于核酸序列的擴增(NASBA)。其中,PCR需要在擴增前將RNA逆轉錄成DNA(RT-PCR),TMA和NASBA直接擴增RNA。

本發明中的核酸雜交技術包括但不限于原位雜交(ISH)、微陣列和Southern或Northern印跡。原位雜交(ISH)是一種使用標記的互補DNA或RNA鏈作為探針以定位組織一部分或切片(原位)或者如果組織足夠小則為整個組織(全組織包埋ISH)中的特異性DNA或RNA序列的雜交。

本發明的蛋白免疫技術包括夾心免疫測定,例如夾心ELISA,其中使用識別生物標志物上不同表位的兩種抗體進行該生物標志物的檢測;放射免疫測定(RIA)、直接、間接或對比酶聯免疫吸附測定(ELISA)、酶免疫測定(EIA)、熒光免疫測定(FIA)、蛋白質印跡法、免疫沉淀法和基于任何顆粒的免疫測定(如使用金顆粒、銀顆?;蛉槟z顆粒、磁性顆?;蛄孔狱c)??衫缭谖⒘康味ò寤驐l的形式中實施免疫法。

檢測MINDY1蛋白的試劑為MINDY1蛋白的特異性結合劑。特異性結合劑是例如蛋白質MINDY1的受體、結合蛋白質MINDY1的凝集素、針對蛋白質MINDY1的抗體、針對蛋白質MINDY1的肽抗體(peptidebody)、雙特異性雙重結合劑或雙特異性抗體形式。

特異性結合劑的例子是肽、肽模擬物、aptamer、spiegelmer、darpin、錨蛋白重復蛋白、Kunitz型域、抗體、單域抗體和單價抗體片段。在本發明的具體實施例中,所述特異性結合劑為MINDY1特異性抗體。

本發明提供了檢測MINDY1的表達水平的產品,所述產品包括(但不限于)芯片、試劑盒、核酸膜條。其中芯片包括:固相載體;以及有序固定在所述固相載體上的寡核苷酸探針或抗體,所述的寡核苷酸探針特異性地對應于MINDY1所示的部分或全部序列,所述抗體特異性的結合MINDY1蛋白。

所述固相載體包括無機載體和有機載體,所述無機載體包括但不限于有硅載體、玻璃載體、陶瓷載體等;所述有機載體包括聚丙烯薄膜、尼龍膜等。

本發明提供了一種試劑盒,所述試劑盒可用于檢測MINDY1基因或蛋白的試劑。選自下組的一種或多種物質:容器、使用說明書、陽性對照物、陰性對照物、緩沖劑、助劑或溶劑。

本發明的試劑盒中還可附有試劑盒的使用說明書,其中記載了如何采用試劑盒進行檢測。

在某些實施方案中,本文提供的是用于檢測一種或多種生物標志物的蛋白質水平的試劑盒。在某些實施方案中,所述試劑盒包含用識別蛋白質生物標志物的抗體包被的試紙條、洗滌溶液、進行該試驗的試劑、蛋白質分離或純化工具、檢測工具以及陽性和陰性對照。在某些實施方案中,所述試劑盒還包含使用該試劑盒的說明書。所述試劑盒可以定制供在家使用、臨床使用或研究使用。

本發明提供了一種核酸膜條,核酸膜條包括基底和固定于所述基底上的寡核苷酸探針;所述基底可以是任何適于固定寡核苷酸探針的基底,例如尼龍膜、硝酸纖維素膜、聚丙烯膜、玻璃片、硅膠晶片、微縮磁珠等。

促進劑和藥物組合物

本發明提供了一種藥物(組合物),它含有有效量的所述的MINDY1的促進劑,以及藥學上可接受的載體。所述的組合物可用于治療宮頸鱗癌。

作為本發明的一種優選方式,所述的MINDY1的促進劑是一種MINDY1的表達載體。所述的表達載體通常還含有啟動子、復制起點和/或標記基因等。

本發明所述藥物組合物可以是適合注射給藥的劑型、適合口服攝取的劑型(如膠囊、片劑、囊片、酏劑)、適合局部給藥的油膏、乳膏或洗劑形式、適合用作滴眼劑的遞送劑型、適合通過吸入給藥的氣霧劑形式(如通過鼻內吸入或口吸入)、適合胃腸外給藥的劑型,即皮下、肌肉內或靜脈內注射。

本發明的藥物組合物還可以與其他治療宮頸鱗癌的藥物聯用,其他治療性化合物可以與主要的活性成分同時給藥,甚至在同一組合物中同時給藥。還可以以單獨的組合物或與主要的活性成分不同的劑量形式單獨給予其它治療性化合物。

優選的,可采用基因治療的手段進行。比如,可直接將MINDY1的促進劑通過諸如注射等方法給藥于受試者;或者,可通過一定的途徑將攜帶MINDY1的促進調劑的表達單位(比如表達載體或病毒等)遞送到靶點上,具體情況需視所述的促進劑的類型而定,這些均是本領域技術人員所熟知的。

下面結合具體的實施例進一步說明本發明,本發明的實施例僅用于解釋本發明,并不意味著限制本發明的保護范圍。

下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明,均為常規方法。

下述實施例中所用的材料、試劑等,如無特殊說明,均可從商業途徑得到。

實施例1篩選與宮頸鱗癌相關的基因標志物

1、樣本收集

收集32例宮頸鱗癌(CESC)組織和18正常組織(N),24例宮頸上皮內瘤樣病變(CIN)組織,所有病例術前未做任何免疫抑制劑治療、放療以及化療,所有納入的研究對象均于收集標本前簽署知情同意書。上述所有標本的取得均通過組織倫理委員會的同意。每組各取4例標本進行基因表達譜的檢測分析,進行差異表達基因的篩選,并在各組全部病例標本中進行驗證實驗。

2、RNA樣品的制備

利用QIAGEN的組織RNA提取試劑盒提取各組組織中的總RNA,具體步驟參考說明書。

3、RNA樣品的質量分析

將上述提取的RNA進行瓊脂糖凝膠電泳,利用Nanodrop2000對所提RNA的濃度和純度進行檢測,瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA完整性,Agilent2100測定RIN值。單次建庫要求RNA總量5μg,濃度≥200ng/μL,OD260/280介于1.8~2.2之間。

4、cDNA文庫的構建

利用Illumina TruseqTM RNA sample Prep Kit進行cDNA文庫的構建,具體操作按說明書進行。

5、測序

使用Illumina X-Ten測序平臺對cDNA文庫進行測序,具體操作按說明書進行。

6、高通量轉錄組測序數據分析

對測序結果進行生物信息學分析,采用metaMA包分析,meta分析中p值合并所用方法為inverse normal method,差異表達基因的篩選標準是FDR<0.05。

7、結果

RNA-seq結果顯示,與正常對照相比,MINDY1基因在宮頸鱗癌組織、以及在宮頸上皮內瘤樣病變組織中的表達量顯著下調,其中宮頸鱗癌組織中的表達量與宮頸上皮內瘤樣病變組織相比,表達量也顯著下調,差異具有統計學意義,因此對MINDY1進行進一步的大樣本驗證。

實施例2 QPCR測序驗證MINDY1基因的差異表達

1、對MINDY1基因差異表達進行大樣本QPCR驗證。

2、RNA提取

利用QIAGEN的組織RNA提取試劑盒提取各組組織中的總RNA,具體步驟參考說明書。

3、QPCR

1)逆轉錄反應

采用FastQμant cDNA第一鏈合成試劑盒(貨號:KR106)進行lncRNA反轉錄,首先去除基因組DNA反應,在試管中加入5×gDNA Bμffer 2.0μl,總RNA 1μg,加RNase Free ddH2O使總體積至10μl,水浴鍋中42℃加熱3min.

將10×Fast RT Bμffer 2.0μl,RT Enzyme Mix 1.0μl,FQ-RT Primer Mix 2.0μl,RNase Free ddH2O 5.0μl,混合后加入上述試管中一起混合共20μl,水浴鍋中42℃加熱15min,95℃加熱3min。

2)引物設計

根據Genebank中MINDY1基因和GAPDH基因的編碼序列設計QPCR擴增引物,由博邁德生物公司合成。具體引物序列如下:

MINDY1基因:

正向引物為5’-TCCGAAACAACCACTTTAG-3’(SEQ ID NO.1);

反向引物為5’-CTTGCTCCTCCTGTAGAA-3’(SEQ ID NO.2)。

GAPDH基因:

正向引物為5’-AATCCCATCACCATCTTCCAG-3’(SEQ ID NO.3);

反向引物為5’-GAGCCCCAGCCTTCTCCAT-3’(SEQ ID NO.4)。

3)QPCR擴增檢驗

用SuperReal PreMix Plus(SYBR Green)(貨號:FP205),進行擴增,實驗操作按產品說明書進行。

采用20μl反應體系:2×SuperReal PreMix Plus 10μl,正反向引物(10μM)各0.6μl,5×ROX Reference Dye2μl,DNA模板2μl,滅菌蒸餾水4.8μl。每個樣本設置3個平行管,所有擴增反應均重復三次以上以保證結果的可靠性。

擴增程序為:95°15min,(95℃10s,55℃30s,72℃32s)×40個循環,95℃15s,60℃60s,95℃15s)。

4)cDNA模板濃度的篩選

將各樣本cDNA混合后,以此為模板進行10倍梯度(10、100、1000、10000、100000倍)稀釋,稀釋后樣品各取2μl作模板,分別用目的基因引物和內參基因引物進行擴增,同時在60-95℃進行融解曲線分析,根據擴增效率高和溶解曲線單峰原則進行模板濃度的篩選。

根據溶解曲線,可以看出,當cDNA的進行10倍稀釋時,PCR的擴增效率較高,溶解曲線單峰比較好。

5)樣品RealTime PCR檢測

將各樣品cDNA 10倍稀釋后取2μl作模板,分別用目的基因引物和內參基因引物進行擴增。同時在60-95℃進行溶解曲線分析,通過融解曲線分析和電泳確定目的條帶,2-ΔΔCT法進行相對定量。

4、結果

結果如圖1所示,與正常組織相比,宮頸鱗癌組織和宮頸上皮內瘤樣病變組織中的MINDY1表達量顯著下調,其中宮頸上皮內瘤樣病變組織與正常組織相比,呈現顯著性下調,宮頸鱗癌組織與宮頸上皮內瘤樣病變組織相比,呈現顯著性下調,差異均具有統計學意義(P<0.05)。

實施例3 MINDY1基因的過表達

根據NCBI中MINDY1基因序列信息設計特異性引物,進行擴增獲得相應基因,將基因片段膠回收后分別與表達載體pEGFP-C1進行連接后轉化入DH5α感受態細胞中,挑取陽性克隆經PCR和測序鑒定后獲得pEGFP-C1-MINDY1重組質粒。

1、細胞培養

宮頸鱗癌細胞(Hela)用含10%胎牛血清和1%P/S的RPIM-1640培養基在37℃、5%CO2的培養箱中培養,當細胞長至80%~90%時,使用0.25%含EDTA的胰蛋白酶常規消化傳代。

2、轉染

將實驗分為3組,分別為對照組(Hela)、空白對照組(轉染pEGFP-C1)、實驗組(轉染pEGFP-C1-MINDY1),按照invitrogen公司的lipofectamine 2000轉染試劑說明書進行轉染。步驟如下:

1)對數生長期的細胞消化輕輕吹打成單細胞懸液,用不含抗生素的培養基接種于6孔板,6孔板的細胞密度達2×105個/孔,當細胞融合率達40%-60%進行轉染試驗;

2)次日轉染,取10μl Lipofectamine 2000稀釋于200μl不含血清的Opti-MEMI培養基,室溫靜置5min;

3)取4μg質粒溶于200μl無血清的Opti-MEM I培養基;

4)將上述兩種稀釋液混合均勻,室溫孵育20分鐘;質粒和轉染試劑的比例為每孔4μg:10μl;

5)將6孔板中細胞更換1.6ml新鮮RPIM-1640培養基。將上述混懸液分別加入到6孔板中,每孔培養液終體積為2ml;

6)轉染6小時后更換2ml新鮮完全培養液繼續培養;

7)72h收集細胞,提取RNA,進行QPCR檢測。

3、QPCR檢測MINDY1基因的轉錄水平

1)細胞總RNA的提取

采用QIAGEN的細胞RNA提取試劑盒進行細胞總RNA的提取,具體步驟詳見試劑盒說明書

3.2逆轉錄步驟同實施例2。

3.3 QPCR擴增步驟同實施例2。

4、統計學方法

實驗都是按照重復3次來完成的,結果數據都是以平均值±標準差的方式來表示,采用SPSS18.0統計軟件來進行統計分析的,過表達MINDY1基因表達組與對照組之間的差異采用t檢驗,認為當P<0.05時具有統計學意義。

5、結果

結果如圖2顯示,相比對照組Hela和轉染空載pEGFP-C1,實驗組pEGFP-C1-MINDY1能夠顯著增加MINDY1基因的表達水平,差異具有統計學意義。

實施例4 CCK-8法檢測宮頸鱗癌細胞增殖活性

1、轉染6小時后用0.25%胰蛋白酶消化細胞,用含10%胎牛血清的培養液配成單個細胞懸液(1×104/孔),接種于96孔培養板中(100μl/孔),每組各設6個復孔,同時設立無細胞的培養液空白對照。

2、于檢測時間點(0h,24h,48h,72h,96h,120h)分別加入細胞增殖檢測試劑CCK-8,工作濃度為1:10,即100μl培養液加入10μl CCK-8;

3、在37℃,5%CO2孵育箱中孵育1h后,進行檢測,酶標儀讀數OD 450nm。

4、結果判斷:轉染后0h,24h,48h,72h,96h,120h使用酶標儀觀察Hela細胞的增殖活性,細胞在波長450nm處的吸光光度值(OD值)表示處于增殖狀態的細胞數量,以無細胞的培養液組OD值為對照。

5、結果

結果如圖3所示,轉染pEGFP-C1-MINDY1的實驗組的細胞增殖顯著減少,提示改變MINDY1的表達水平可以改變宮頸鱗癌細胞的增殖能力,說明MINDY1與宮頸鱗癌細胞的增殖相關。

實施例5 Transwell方法檢測宮頸鱗癌細胞遷移和侵襲

1、細胞遷移能力檢測

1)遷移前一天將完全培養基加入孔板中,放入小室置于培養箱中過夜;

2)將轉染48h后的細胞進行饑餓處理,收集細胞計數,用0.2%BSA的無血清培養基制成1×105的懸液。

3)取200μl細胞懸液接種于Transwell小室內培養。

4)取出小室,吸干剩余液體后置于70%甲醇固定30min,用棉簽擦去上室面的細胞。

5)小室浸入0.4%結晶紫染色10min,PBS清洗兩遍,顯微鏡下隨機選取視野計數膜底面的細胞數。

2、細胞侵襲能力檢測

1)侵襲實驗前一天在冰上用RPIM 1640 1:8稀釋基質膠,每個24孔懸掛式小室底部膜上室面加稀釋后的基質膠60μl干燥待用。

2)水化基底膜:每孔加入50μl含10g/LBSA的無血清培養液,37℃,30min,吸出培養板中殘余液體。

3)將轉染48h后的細胞進行饑餓處理,收集細胞計數,用0.2%BSA的無血清培養基制成1×105的懸液。

4)取出小室,吸干剩余液體后置于70%甲醇固定30min,用棉簽擦去上室面的細胞。

5)小室浸入0.4%結晶紫染色10min,PBS清洗兩遍,顯微鏡下隨機選取視野計數膜底面的細胞數。

3、數據處理

用SPSS18.0軟件對數據進行統計學分析。計量資料用均數±標準差表示。多個樣本均數比較采用單因素方差分析,P<0.05為差異有統計學意義。

4、結果

結果如圖4所示,實驗組的細胞遷移和侵襲數分別較轉染空白質粒的少,說明過表達MINDY1基因降低宮頸鱗癌細胞的遷移和侵襲能力。

上述實施例的說明只是用于理解本發明的方法及其核心思想。應當指出,對于本領域的普通技術人員來說,在不脫離本發明原理的前提下,還可以對本發明進行若干改進和修飾,這些改進和修飾也將落入本發明權利要求的保護范圍內。

序列表

<110> 北京泱深生物信息技術有限公司

<120> MINDY1在宮頸病變疾病中的應用

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

tccgaaacaa ccactttag 19

<210> 2

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

cttgctcctc ctgtagaa 18

<210> 3

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

aatcccatca ccatcttcca g 21

<210> 4

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

gagccccagc cttctccat 19

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