一種檢測雜色曲霉素的elisa試劑盒的制作方法

文檔序號:3592419
專利名稱:一種檢測雜色曲霉素的elisa試劑盒的制作方法
技術領域
本發明涉及生物化學領域。具體而言,本發明涉及檢測雜色曲霉素的ELISA試劑盒。
背景技術
雜色曲霉素(Sterigmatocys簡稱ST)是一種雜環化合物(圖)具有很強的肝及腎臟毒素,能誘發多種腫瘤。南非某些地區的肝癌高發可能與ST有關。雜色曲霉素是,可導致膽管癌和肝癌,有致突變性,但對食品的污染頻率較低。ST還可轉化成更強烈的致癌物黃曲霉毒素。ST還能引起一些動物疾病。ST可有10多種真菌代謝產生,在人工培養基的產量高達10g/kg。已知可被ST污染的食品包括:大米、小麥、玉米、花生、大豆、火腿、奶酪、咖啡等。雜色曲霉素經三氯化鋁噴霧后加熱,可在365nm波長紫外光下呈黃色熒光。衛生研究所建立的檢測雜色曲霉素的薄層色譜法已于1984年列為國家標準(GB/T5009.25-1996)。該法對大米、玉米、小麥的最低檢出量為25 μ g/kg,黃豆、花生為50yg/kg。雜色曲霉素的
結構如下:
權利要求
1.一種抗雜色曲霉素的抗體,其特征在于,所述的抗體包括輕鏈和重鏈,其中所述輕鏈的氨基酸的序列如序列表SEQ ID NO:1所示,所述重鏈的氨基酸的序列如序列表中SEQ IDNO:2所示。
2.編碼權利要求1所述抗體的核苷酸序列。
3.權利要求1所述的抗體在制備檢測雜色曲霉素試劑、藥劑或試劑盒中的應用。
4.一種檢測雜色曲霉素的ELISA試劑盒,包括權利要求1所述的抗體。
5.權利要求4所述的ELISA試劑盒,其特征在于,所述的抗體帶有生物標記或化學標記,所述生物標記或化學標記為突光標記、放射性標記或酶標記。
6.權利要求5所述的ELISA試劑盒,其特征在于,所述的酶標記為辣根過氧化酶標記。
7.權利要求5所述的ELISA試劑盒,還包括:辣根過氧化物酶底物緩沖液、雜色曲霉素標準品、偶聯BSA的雜色曲霉素、陰性對照樣品BSA。
8.—種檢測雜色曲霉素的方法,包括以下步驟: a)用包被液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液)稀釋BSA-ST至濃度為2 μ g/ml,取稀釋后的BSA-ST加入酶標板中,每孔100μ 1,4°C過夜; b)洗滌液(PH7.4PBS)清洗酶標板3次,每次在搖床上搖5_8min ; c)將待測樣品和100μ I 按 I: 3000-1: 5000 稀釋的 HRP-Sulfo-SMCC-ASPl 稀釋液,同時加入到包被的酶標板中,37°C孵育2h,每個樣品包被2個孔,同時將標準品進行梯度稀釋依次為 5ng/ml、10 ng/ml、40ng/ml、160ng/ml、640ng/ml、2560ng/ml,每孔 100 μ I ; d)再用洗滌液清洗3次,加辣根過氧化物酶底物緩沖液100μ 1,顯色5min后,加入終止液100 μ I,終止顯色; e)用酶標儀檢測0D450的值,依據標準品的吸光值制備標準曲線,從而根據吸光值判斷所測樣品中ST的濃度。
全文摘要
本發明公開了一種檢測雜色曲霉素的ELISA試劑盒,所述試劑盒包括抗雜色曲霉素抗體,所述抗體包括輕鏈和重鏈,其中輕鏈的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示,重鏈的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示,本發明公開了制備上述抗體的方法。本發明所述的ELISA檢測試劑盒,還包括辣根過氧化物酶底物緩沖液、蛋白標準品ST(100ug/ml,0.1ml)、包被原BSA-ST、陰性對照樣品BSA,本發明同時還公開了上述試劑盒的使用方法。
文檔編號C07K16/14GK103193884SQ20131013697
公開日2013年7月10日 申請日期2013年4月19日 優先權日2013年4月19日
發明者江飛劍, 王海彬, 楊承剛, 韋國棟 申請人:中華人民共和國臺州出入境檢驗檢疫局
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