一種用于治療革蘭氏陰性菌感染的抗菌藥物組合物的制作方法

文檔序號:10521721
一種用于治療革蘭氏陰性菌感染的抗菌藥物組合物的制作方法
【專利摘要】本發明揭示了一種用于治療革蘭氏陰性菌感染的抗菌藥物組合物,所述組合物包括:TNP?2092和細胞膜滲透劑。其中,所述細胞膜滲透劑為多粘菌素B或多粘菌素E。本發明的一種用于治療革蘭氏陰性菌感染的抗菌藥物組合物,通過TNP?2092和細胞膜滲透劑聯合使用,治療革蘭氏陰性菌感染,其抗菌活性較單獨使用TNP?2092或細胞膜滲透劑時增強,具有抗菌的協同作用,可用于治療革蘭氏陰性菌感染,包括耐藥菌感染。
【專利說明】
-種用于治療革蘭氏陰性菌感染的抗菌藥物組合物
技術領域
[0001] 本發明屬于醫藥化學藥物組合物技術領域,尤其設及一種用于治療革蘭氏陰性菌 感染的抗菌藥物組合物。
【背景技術】
[0002] 由于抗菌素耐藥性的產生,革蘭陰性菌感染的治療正面臨巨大的挑戰。臨床上主 要的致病革蘭氏陰性菌包括:大腸埃希氏菌化.col 1)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumonia)、鮑曼不動桿菌(Acinetobacter baumannii )、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、嗜麥芽窄食單胞菌(S.maltophilia)、傷寒沙口菌(Salmonella Typhi)、非傷 寒沙口菌(non-typhoidal Salmonella)和志賀菌屬(Shigella)等。在常見醫院獲得性感染 中,肺炎克雷伯菌是一個主要致病菌,碳氨霉締類抗菌藥物曾是治療該菌感染的最后防線, 然而在部分地區,超過一半的肺炎克雷伯感染對碳氨霉締類藥物產生耐藥,運種耐藥性已 經播散到世界范圍。在中國,碳青霉締耐藥的的腸桿菌(CRE)逐漸增多。在腸桿菌科細菌中, W肺炎克雷伯CRE最為多見,2009/2012年中國CHI肥T對碳青霉締類抗生素耐藥的肺炎克雷 伯菌的分離率分別為2.1 %、6.2%、9.3%和10.8%。
[0003] 通過對含有利福霉素和/或哇諾酬耐藥基因突變并同時包含有IpxC和TolC基因突 變(包括單獨和組合)的大腸桿菌D21的等基因菌株的研究顯示,影響TNP-2092抗菌活性的 因素包括:(l)WTolC為外膜通道的藥物外排機制;(2)由IpxC變異引起的細胞內藥物富集。 基于運些結果可W假設,如果與一個能提高TNP-2092細胞內富集,或者能抑制TNP-2092外 排的增效劑聯合使用,TNP-2092對常見革蘭氏陰性細菌的抗菌活性可W得到提高。

【發明內容】

[0004] 本發明的目的是提供一種用于治療革蘭氏陰性菌感染的抗菌藥物組合物。
[0005] 本發明通過如下技術方案實現上述目的:
[0006] -種用于治療革蘭氏陰性菌感染的抗菌藥物組合物,所述組合物包括:TNP-2092 和細胞膜滲透劑;
[0007] 其中,所述TNP-2092的化學名為:
[000引(R)-3-[[[4-[l-[l-(3-簇基-1-環丙基-7-氣-9-甲基-4-氧-4-氨-8-哇嗦基)-3- 化咯烷基]環丙基](甲基)氨基]-1-贓晚基]亞氨基]甲基]-利福霉素 SV(英文名:(1〇-3- (((4-((l-(l-(3-c曰rboxy-1-cyclopropyl-7-fluor〇-9-methyl-4-〇x〇-4H-quinolizin-8- yl)pyrrolidin-3-yl)cyclopropyl)(methyl)amino)piperidin-1-yl)imino)methyl)- rifamyc in SV),其結構式如下:
[0009]
[0010] 進一步的,所述組合物包括重量比為3:400-125:4的TNP-2092和細胞膜滲透劑。
[0011] 進一步的,所述細胞膜滲透劑為多粘菌素 B或多粘菌素 E,包括運兩個藥物的各種 可能的晶型、鹽型和制劑。
[0012] 進一步的,所述組合物包括重量比為3:400-125:4的TNP-2092和多粘菌素 B。
[0013] 進一步的,所述組合物包括重量比為3:400-25:3的TNP-2092和多粘菌素 E。
[0014] 上述的抗菌藥物組合物在對抗革蘭氏陰性菌中的應用。
[0015] 進一步的,所述組合物為TNP-2092和細胞膜滲透劑的聯合使用,或者為TNP-2092 和細胞膜滲透劑的混合制劑。
[0016] 進一步的,所述革蘭氏陰性菌包括大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動桿菌、 銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌、傷寒沙口菌、非傷寒沙口菌和志賀菌屬。
[0017] 與現有技術相比,本發明的有益效果是:本發明的一種用于治療革蘭氏陰性菌感 染的抗菌藥物組合物,通過TNP-2092和細胞膜滲透劑聯合使用,治療革蘭氏陰性菌感染,其 抗菌活性較單獨使用TNP-2092或細胞膜滲透劑時增強,具有抗菌的協同作用,可用于治療 革蘭氏陰性菌感染,包括耐藥菌感染。
【附圖說明】
[001引圖1是本發明實施例的TNP-2092和多粘菌素 B藥物組合物針對大腸桿菌ATCC 25922菌株的棋盤法最低殺菌濃度(MBC)試驗結果圖;
[0019]圖2是本發明實施例的TNP-2092和多粘菌素 E藥物組合物針對大腸桿菌ATCC 25922菌株的棋盤法最低殺菌濃度(MBC)試驗結果圖。
【具體實施方式】
[0020] 本發明的藥物組合體外抗菌活性的測試使用的是測定最低抑菌濃度(MIC)和最低 殺菌濃度(MBC)為終點的標準96孔板棋盤法檢驗平臺。最初的研究主要使用大腸桿菌ATCC 25922作為革蘭氏陰性代表菌株。所觀察到的結果與醫院內的主要革蘭氏陰性菌一一銅綠 假單胞菌、肺炎克雷伯菌、鮑氏不動桿菌和嗜麥芽窄食單胞菌一一的相關性用類似的方法 進行評估。
[0021] 大腸桿菌ATCC 25922是由臨床實驗室標準協會(CLSI)推薦的用于MIC測試的質量 控制菌株,最初是從美國品種組織培養(ATTC)存儲庫獲得,作為革蘭氏陰性致病菌的模型 使用。其它的革蘭氏陰性菌株,包括兩株銅綠假單胞菌,兩株肺炎克雷伯菌、一株鮑氏不動 桿菌和一株嗜麥芽窄食單胞菌,也來自ATCC。
[0022] TNP-2092和多粘菌素 B或E藥物組合的最低抑菌濃度(MIC)由雙試劑棋盤稀釋法遵 照化SI微量肉湯稀釋法藥敏試驗標準進行測定。為了獲得每個藥物組合的96孔板,需根據 W下描述準備兩個過度稀釋板。在含0.002% (體積:體積)吐溫80的經陽離子校正的 Mueller Hintonation肉湯中,使用直接菌落懸液法制備足夠量的含有約5X 105CFU/ml細 菌的培養液。加入0.2ml的上述懸液到第一塊96孔板(ID-1)的第一列孔中,加0.1ml到所有 剩下的孔中。加入0.2ml同樣的細胞培養懸液至第二塊96孔板(ID-2)的第1行孔中,加0.1ml 到所有剩下的孔中。加入適當濃度的藥品"化合物-Γ (代表組合測試的兩個藥物之一)至板 ID-1的第1列的每個孔。然后做整板的二倍連續稀釋,每次轉移換加樣頭,直到達到第11列 孔。從第11列孔中吸出0.1ml并丟棄,第12列孔中只含細胞培養液而沒有藥物。接下來,適當 濃度的藥品"化合物-2"(代表組合測試的兩個藥物之二)被稀釋加入至板ID-2的第1行的每 個孔。然后沿板下行做二倍連續稀釋,每次轉移換加樣頭,直到第7行孔。從第7行孔中吸出 0.1ml并丟棄,第8行只包含細胞培養液而沒有藥物。最后,從ID-1和ID-2中均轉移0.05ml至 第Ξ塊96孔板作為"最終MIC測試板"。運將導致2個化合物的進一步的二倍稀釋,并產生兩 種藥物的77個不同的測試組合。而由第12列孔可得到單獨化合物-2的MIC,第8行孔可得到 單獨化合物-1的MIC。第8行和第12列的交叉處不包含藥物,可作為細菌的正常生長參比。 "最終MIC測試板"在35Γ下靜態培養18-24小時,可直觀讀出每個單獨藥物或藥物組合物的 MIC值。
[0023] 為了測定最低殺菌濃度(MBC),當MIC測定后,通過自動加樣器將每孔的0.008ml從 MIC測試板轉移到加有木炭的瓊脂板。轉移液體小滴在生物柜中風干,然后瓊脂板在35°C培 養18-24小時。MBC數值定義為在18-24h內殺死99.9% W上的試驗菌株,或在每0.008ml液滴 中含有少于5個菌落形成單位(CFU)的最低藥物濃度。
[0024] 體外藥物相互作用的分級抑制濃度(FIC)使用W下公式計算:
[0025] FIC =化合物X的最低MIC(混合)/化合物X的最低MIC(單用)+化合物Y的最低MIC (混合)/化合物Y的最低MIC(單用)
[0026] 分級抑菌濃度(FIC)或分級殺菌濃度(FBC)的結果可被定義為協同,疊加,無區別, 或括抗幾種情況。如果沒有觀察到終點而不能確定MIC/MBC,為了運算目的,終點假設為大 于測試范圍的下一稀釋度的濃度。
[0027]
[002引實施例;
[0029]用兩種藥物組合棋盤法試驗對MIC和MBC終點進行平行測定。TNP-2092、多粘菌素 B 和多粘菌素 E在單獨進行測試時對大腸桿菌ATCC 25922具有一定抗菌活性(見表1)。通過棋 盤法對不同比例的TNP-2092與多粘菌素 B或多粘菌素 E進行藥物組合測試時,若WMIC為測 試終點,TNP-2092與多粘菌素 B或多粘菌素 E具有疊加和協同作用,若WMBC為測試終點, TNP-2092與多粘菌素 B或多粘菌素 E均具有明顯協同作用(見表2和圖1、圖2)。由圖1可知, TNP-2092的測試濃度區間為0.03-2yg/mL,多粘菌素 B的測試區間為0.008-祉g/mL,在TNP- 2092與多粘菌素 B的重量比0.25:0.008至0.03:4間均觀察到二者的疊加或協同作用。由圖2 可知,TNP-2092的測試濃度區間為0.03-2yg/mL,多粘菌素 E的測試區間為0.03-3化g/mL,在 TNP-2092與多粘菌素 E的重量比0.25:0.03至0.03:4間均觀察到二者的疊加或協同作用。因 而多粘菌素 B或多粘菌素 E可W增強TNP-2092對大腸桿菌的活性,從而達到更好的治療效 果。
[0030] 表1 TNP-2092、多粘菌素 B和多粘菌素 E單獨使用對抗大腸桿菌ATCC 25922的MIC 和MBC (yg/mL) W 及MBC99.9/MIC 比值
[0031] _
[0032] 表2 TNP-2092與多粘菌素 B或多粘菌素 E藥物組合物對抗大腸桿菌ATCC 25922的 FIC和FBC值
[0033]
[0034] ~針對其它革蘭氏陰性菌中,多粘菌素 B和多粘菌素 E對TNP-2092的殺菌活性也有增I 效作用,結果見表3和表4。根據WMIC或MBC為終點得到的FIC或FBC數據表明,多粘菌素 B和 多粘菌素 E與TNP-2092存在疊加或協同的殺菌作用。特別是在WMBC為終點時,TNP-2092與 多粘菌素 E存在明顯的藥物協同作用(見表4)。
[0035] 表3 TNP-2092與多粘菌素 B或多粘菌素 E對抗多種菌株的FIC值
[0038] 表4 TNP-2092與多粘菌素 B或多粘菌素 E對抗多種菌株的FBC值
[0036]
[0037]
[0039]
[0040] 由此可見,細胞滲透劑多粘菌素 B或多粘菌素 E與TNP-2092對多種革蘭氏陰性菌具 有協同抗菌活性,通過與多粘菌素 B或多粘菌素 E聯合使用,TNP-2092對革蘭氏陰性菌的抑 菌和殺菌活性明顯提高,從而達到治療革蘭氏陰性菌感染的目的。
[0041] W上所述的僅是本發明的一些實施方式。對于本領域的普通技術人員來說,在不 脫離本發明創造構思的前提下,還可W做出若干變形和改進,運些都屬于本發明的保護范 圍。
【主權項】
1. 一種用于治療革蘭氏陰性菌感染的抗菌藥物組合物,所述組合物包括:TNP-2092和 細胞膜滲透劑; 其中,所述TNP-2092的化學名為: (R)-3_[[[4-[l-[l-(3-羧基-1-環丙基-7-氟-9-甲基-4-氧-4-氫-8-喹嗪基)-3-吡咯 烷基]環丙基](甲基)氨基]-1-哌啶基]亞氨基]甲基]-利福霉素 SV,其結構式如下:2. 根據權利要求1所述的一種用于治療革蘭氏陰性菌感染的抗菌藥物組合物,其特征 在于:所述組合物包括重量比為3:400-125:4的TNP-2092和細胞膜滲透劑。3. 根據權利要求1所述的一種用于治療革蘭氏陰性菌感染的抗菌藥物組合物,其特征 在于:所述細胞膜滲透劑為多粘菌素 B或多粘菌素 E。4. 根據權利要求3所述的一種用于治療革蘭氏陰性菌感染的抗菌藥物組合物,其特征 在于:所述組合物包括重量比為3:400-125:4的TNP-2092和多粘菌素 B。5. 根據權利要求3所述的一種用于治療革蘭氏陰性菌感染的抗菌藥物組合物,其特征 在于:所述組合物包括重量比為3:400-25:3的TNP-2092和多粘菌素 E。6. 權利要求1-5任一項所述的抗菌藥物組合物在對抗革蘭氏陰性菌中的應用。7. 根據權利要求6所述的抗菌藥物組合物在對抗革蘭氏陰性菌中的應用,其特征在于: 所述組合物為TNP-2092和細胞膜滲透劑的聯合使用,或者為TNP-2092和細胞膜滲透劑的混 合制劑。8. 根據權利要求6所述的抗菌藥物組合物在對抗革蘭氏陰性菌中的應用,其特征在于: 所述革蘭氏陰性菌包括大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動桿菌、銅綠假單胞菌、嗜麥 芽窄食單胞菌、傷寒沙門菌、非傷寒沙門菌和志賀菌屬。
【文檔編號】A61K38/12GK105879009SQ201610238915
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年4月18日
【發明人】馬振坤, 格雷戈瑞·羅伯森, 王曉梅
【申請人】丹諾醫藥(蘇州)有限公司
再多了解一些
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