小白菊內酯在制備治療肺癌藥物中的應用

文檔序號:9897059
小白菊內酯在制備治療肺癌藥物中的應用
【技術領域】
[0001 ]本發明屬于藥物化學領域,具體設及小白菊內醋在制備治療肺癌藥物中的應用。
【背景技術】
[0002]肺癌是世界上最常見的,且是發病率和死亡率增長最快,對人群健康和生命威脅 最大的惡性腫瘤之一。近年來肺癌的發病率和死亡率均明顯增高,究其原因,目前普遍認為 應歸結于其具有高局部復發率和高遠端轉移率的特點,而其惡性程度更是很大程度上因其 高轉移率,但目前臨床上抑制腫瘤轉移,起到治療作用的藥物很少,且伴隨著預后差等問 題,急需開發新的治療藥物。
[000引小白菊內醋,是從艾菊內純化出的一種倍半祗稀內醋化合物。分子式:Cis也003,分 子量:248,性狀:無色晶體,其結構如下:
[0005] 小白菊內醋的相關研究,主要用于白血病和神經系統腫瘤的臨床前研究中。除炎 性腸病外、類風濕和腎炎都可被其干預治療,其化學衍生物含笑內醋二甲胺(DMAPT)也進入 神經膠質瘤的臨床試驗中。
[0006] 但是,小白菊內醋應用于肺癌的治療及其藥理學特征目前尚未報道。本項目研究 首次發現天然產物小白菊內醋,可W通過抑制和逆轉肺癌上皮細胞-間充質轉變(EMT)的運 一關鍵過程,抑制肺癌的生長,侵襲和轉移,為小白菊內醋在臨床上的應用奠定了基礎,有 望成為一種新的抑制肺癌轉移的藥物。

【發明內容】

[0007] 針對目前肺癌發病率高,轉移率高,缺乏有效治療藥物的現狀,本發明提出了小白 菊內醋(Parthenolide,PT)在制備治療肺癌藥物中的應用。
[000引為達到上述目的,本發明創造的技術方案是運樣實現的:
[0009]小白菊內醋在制備治療肺癌藥物中的應用,所述小白菊內醋的結構式為:
[0011]進一步的,所述小白菊內醋在制備治療肺癌藥物中的應用是通過逆轉肺癌細胞上 皮細胞-間充質轉化,從而抑制肺癌細胞的生長、侵襲或轉移。
[0012]進一步的,所述肺癌包括小細胞肺癌及非小細胞肺癌。
[0013] 進一步的,所述治療肺癌藥物包含小白菊內醋或其藥學上可接受的鹽,水合物或 其組合及輔料。
[0014] 進一步的,所述含有小白菊內醋的肺癌藥物可制備成片劑、膠囊、口服液體制劑、 噴霧劑、注射液中的任意一種或兩種W上的組合。
[0015] 相對于現有技術,本發明創造所述的小白菊內醋在制備治療肺癌藥物中的應用具 有W下優勢:
[0016] 小白菊內醋對肺癌細胞系的增殖、遷移均具有顯著的抑制作用,并可通過逆轉其 EMT,顯著的抑制肺部腫瘤細胞的轉移,同時可引發其在胞內凝集而使細胞喪失遷移運動能 力,抑制腫瘤細胞的轉移,引發了腫瘤細胞轉移的能力的削弱,抑制腫瘤轉移的與發展,可 在肺癌治療上發揮顯著成效。
【附圖說明】
[0017] 構成本發明創造的一部分的附圖用來提供對本發明創造的進一步理解,本發明創 造的示意性實施例及其說明用于解釋本發明創造,并不構成對本發明創造的不當限定。在 附圖中:
[001引圖1示出了小白菊內醋對NCI-H460(A)、NCI-H446(B)和A549(C)細胞增殖的抑制作 用;
[0019] 圖2示出了小白菊內醋對NCI-H460(A)、NCI-H446(B)和A549(C)細胞遷移能力的抑 制作用;
[0020] 圖3示出了小白菊內醋對S種細胞系上皮標志分子0ccludin、Claudin3和EMA表達 水平的影響;
[0021] 圖4示出了小白菊內醋對S種細胞系間充質標志分子N-Ca化erin、VEGFRl和CD31 表達水平的影響;
[0022] 圖5示出了小白菊內醋對S種細胞系細胞骨架重排相關的EMT標志分子Viment in 表達水平的影響;
[0023] 圖6示出了小白菊內醋對S種細胞系細胞骨架重構的影響;
[0024] 圖7示出了小白菊內醋對在荷瘤小鼠腫瘤大小的抑制作用;
[002引圖8示出了小白菊內醋對在荷瘤小鼠腫瘤組織中EMT標志分子Occludin、 Claudin3、EMA、N-Ca 化 erin、VEGFRl、CD31 和 Vimentin 表達水平的影響;
[0026] 圖9示出了小白菊內醋對在荷瘤小鼠腫瘤截面積壞死區域比例的影響;
[0027] 圖10示出了小白菊內醋對在荷瘤小鼠肺轉移灶的影響。
【具體實施方式】
[0028] 除非另外說明,本文中所用的術語均具有本領域技術人員常規理解的含義,為了 便于理解本發明,將本文中使用的一些術語進行了下述定義。
[0029] 在說明書和權利要求書中使用的,單數型"一個"和"運個"包括復數參考,除非上 下文另有清楚的表述。例如,術語"(一個)細胞"包括復數的細胞,包括其混合物。
[0030] 所有的數字標識,例如抑、溫度、時間、濃度,包括范圍,都是近似值。要了解,雖然 不總是明確的敘述所有的數字標識之前都加上術語"約"。同時也要了解,雖然不總是明確 的敘述,本文中描述的試劑僅僅是示例,其等價物是本領域已知的。
[0031] 本發明提出了小白菊內醋(Parthenolide,PT化制備治療肺癌藥物中的應用。所 述小白菊內醋可W抑制肺癌的生長和轉移,且本發明通過具體的實施例:包括MTT實驗, 化answel 1、劃痕實驗、、免疫巧光等細胞及動物實驗研究表明小白菊內醋可W逆轉肺癌細 胞上皮細胞-間充質轉化化MT),從而抑制肺癌細胞(小細胞肺癌及非小細胞肺癌)的侵襲和 轉移,能夠制備肺癌治療藥物。
[0032] 所述治療肺癌藥物可W包含小白菊內醋或其藥學上可接受的鹽,水合物或其組合 及輔料。且上述藥物可制備成片劑、膠囊、口服液體制劑、噴霧劑、注射液等劑型,作為抗肺 癌方面藥物應用于臨床。
[0033] 下面結合實施例及附圖來詳細說明本發明創造。
[0034] 其中,實施例中,所用的試驗材料及其來源包括:
[0035] 細胞系:NCI-H446(人小細胞肺癌細胞)、NCI-H460(人大細胞肺癌細胞)和A549(人 肺腺癌細胞系),均購自凱基生物科技發展有限公司(南京,中國)。
[0036] 實驗藥物與試劑:小白菊內醋,購自上海阿拉下試劑有限公司;抗體Occludin,貨 號:ab644 82,購自Abcam公司(劍橋,英國);EMA,貨號:ab 15694了,購自Abcam公司(劍橋,英 國);N-ca化erin,貨號:abl8203,購自Abcam公司(劍橋,英國);VEGFRl,貨號:AF6204,購自 八'門11^7公司;〔034,貨號:0。6139,購自4'門11^7公司;(:1曰11(11113,貨號:4。0129,購自 Aff inity公司;Vimentin,貨號:AF0292,購自Affinity公司;四甲基偶氮挫鹽(MTT),貨號: TB0799-lg,膜蛋白酶,貨號:T0458-10,購自上海生工生物工程有限公司;RPMI 1640培養 基,貨號:18-02E,W及DMEM培養基,貨號:07-021,均購自北京鈕因華信科技發展有限公司; 胎牛血清FBS化yclone品牌),貨號:SV30184.02、細胞培養皿及孔板(Nunc品牌),均購自 Abcam公司(劍橋,英國);二甲基亞諷(DMSO),貨號:DN3039A,購自美國Sigma公司;羊抗兔 IgG-門TC,貨號:KGAA26,購自凱基生物科技發展有限公司(南京,中國);細胞骨架紅色巧光 探針(ActinRed),貨號:KGMP0012,購自凱基生物科技發展有限公司(南京,中國)。
[0037] 實驗儀器:培養箱(施都凱儀器,上海)型號:STIK化-161HI;無菌生物安全柜 (Telstar,西班牙)型號:Bio II A;酶標儀(賽默飛世爾,美國)型號:FC 357;光學顯微鏡 (Nikon,日本)型號:Eclipse Ti;高內涵細胞分析系統(賽默飛世爾,美國)型號:Array Scan VTI;激光共聚焦顯微鏡(Nikon,日本)型號:Eclipse Ti;全自動組織染色機化eica, 德國)型號:AUT0STAI肥R XL。
[0038] 實施例中的細胞培養條件:細胞需置于37°C、5%C〇2、飽和濕度的條件下培養箱中 培養。若細胞達到80%-90%接觸匯合時需進行傳代到2-3個裝有適量培養基的培養皿中, 繼續培養或應用于相應實驗中。
[0039] 實施例1小白菊內醋對肺癌細胞系NCI-H446、NCI-H460和A549增殖抑制作用檢測
[0040] 實驗方法:MTT比色法
[0041] 具體實驗步驟為:將細胞接種于96孔培養板上(5X103cells/孔),置于37°C、0)2 (5 % )培養箱中過夜培養。第二天,棄去培養液,分別加入濃度為0,4,祉M小白菊內醋細胞培 養液,并設置不加藥物的對照孔。置于37°C、0)2(5%)培養箱培養4她后,每孔加入20化四甲 基偶氮挫鹽(MTT)母液(母液濃度為5mg/mL),繼續解育4h。然后將培養液吸出,每孔加入150 化DMSO作溶劑溶解甲瑣,溶解后用酶標儀測定490nm處的吸光度,按下式計算細胞存活率: 存活率% =(實驗組OD值-調零孔OD值)/(陰性對照組OD值-調零孔OD值)X 100% ;用 Graphpad Prism 5軟件進行IC50值的計算(I巧0值可W用來衡量藥物誘導調亡的能力,即 誘導能力越強,該數值越低)。用Excel軟件繪制藥物對細胞的劑量-響應曲線,各指標均用 均值±標準差來表示。
[0042] 實驗結果
[0043] 小白菊內醋對小細胞肺癌NCI-H446、大細胞肺癌NCI-H460和肺腺癌A549均有抑制 作用。如附圖 1 所示,NCI-H446、NCI-H460 和 A549 的 IC50 分別為 8.95iiM、16.25iiM
再多了解一些
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